DIN 10109:2016-05
Микробиологический анализ мяса и мясных продуктов. Определение аэробных молочнокислых бактерий. Метод шпателя.
- Стандартный №
- DIN 10109:2016-05
- Дата публикации
- 2016
- Разместил
- German Institute for Standardization
- Последняя версия
- DIN 10109:2016-05
- сфера применения
-
Обзор стандарта и его техническое развитие
DIN 10109:2016-05 «Микробиологический анализ мяса и мясных продуктов. Определение молочнокислых бактерий, выращенных аэробно. Метод скребка» заменяет версию 1991 года и является обязательным стандартом, опубликованным Немецким институтом стандартизации (DIN). Этот стандарт подпадает под действие ICS 07.100.30 (Микробиология) и 67.120.10 (Мясо и мясные продукты) и применяется к обнаружению молочнокислых бактерий в мясе, мясных продуктах и продуктах, содержащих мясные ингредиенты.
Основные технические изменения
По сравнению с версией 1991 года, эта редакция включает три существенных обновления: добавление Главы 2 «Нормативные ссылки»; добавление Раздела 5.4 «Эксплуатационные испытания для обеспечения качества питательных сред»; а также технические и редакционные правки для соответствия действующим правилам проектирования.
Сравнительные параметры DIN 10109:1991 DIN 10109:2016 Справочные стандарты Не систематизированы Явно ссылаются на DIN EN ISO 6887-1/2, 11133 Контроль качества Основные требования Проверка эффективности новой питательной среды Определение терминов Краткое описание Подробное определение характеристик классификации молочнокислых бактерий Контроль pH Общие положения Требования Точно укажите pH 5,8±0,1 (50 °C) Принцип и методология испытания
В настоящем стандарте для подсчёта молочнокислых бактерий используется модифицированная среда MRS (pH=5,7) и метод соскребания. После гомогенизации и серийного разбавления образца 0,1 мл раствора высевается на пластину с модифицированным агаром MRS. Используя стерильный скребок, пластину равномерно распределяют и инкубируют при температуре 25℃ в аэробных условиях в течение 3 дней, после чего подсчитывают типичные колонии.
Основные характеристики модифицированной среды MRS: Селективное ингибирование немолочнокислых бактерий, особенно добавление сорбиновой кислоты (0,14%), которая подавляет рост дрожжей и других бактерий, обеспечивая при этом хорошую скорость восстановления молочнокислых бактерий.
Спецификации приготовления питательной среды
Основные требования к ингредиентам
Модифицированная среда MRS содержит: 10,0 г казеинового пептона, переваренного трипсином, 8,0 г мясного экстракта, 4,0 г порошка дрожжевого экстракта, 20,0 г глюкозы, 1,0 г Tween 80®, 2,0 г дикалия гидрофосфата, 0,2 г гептагидрата сульфата магния, 0,05 г тетрагидрата сульфата марганца, 2,0 г диаммония цитрата, 5,0 г ацетата натрия, 12,0–15,0 г агара и дистиллированную воду до 1000 мл.
Приготовление основных растворов
Название раствора Концентрация Условия стерилизации Требования к хранению Раствор сульфата магния 1 г/100 мл 100℃ 60 мин 0-5℃ в течение нескольких месяцев Раствор сульфата марганца 1 г/100 мл 100℃ 60 мин 0-5°C в течение нескольких месяцев Раствор сорбиновой кислоты 10 г/100 мл Щёлочь раствор Подготовка к немедленному использованию Процедура тестирования и контроль качества
Время обработки образца
Время от приготовления начального разведения до инокуляции питательной среды не должно превышать 30 минут, чтобы обеспечить постоянную выживаемость микроорганизмов.
Условия культивирования
Используйте точно контролируемый инкубатор, поддерживая 25±1°C в течение 72±3 часов. Перед инкубацией высушите чашки в инкубаторе вверх дном до тех пор, пока любые капли воды на поверхности питательной среды не исчезнут.
Правила подсчета
Подсчитывайте только чашки, содержащие от 1 до 150 колоний; это число можно увеличить до 300, если колонии хорошо разделены. Колонии, которые являются белыми или не совсем белыми, плоские или приподнятые, гладкие или шероховатые, все подсчитываются как молочнокислые бактерии.
Метод расчета и выражение результата
Количество колоний рассчитывается с помощью метода средневзвешенного значения: N = ΣC / (n1 + 0,1n2), где ΣC - общее количество колоний на всех подсчитываемых чашках Петри, n1 - количество чашек с самым низким разбавлением, а n2 - количество чашек со следующим по величине разбавлением. Окончательные результаты выражаются как 1,0-9,9 × 10n КОЕ/г или мл, округленные до одного десятичного знака.
Предел обнаружения: <1,0 × 101 КОЕ/мл для неразбавленных образцов и <1,0 × 102 КОЕ/г для разбавленных образцов. При использовании метода 3-4 чашек чувствительность обнаружения возрастает на порядок.
Требования к обеспечению качества и валидации
Согласно DIN EN ISO 11133, модифицированная среда MRS должна быть валидирована на продуктивность и селективность. Для проверки эффективности среды следует использовать стандартные штаммы, такие как Lactobacillus sakei WDCM 00015 и Pediococcus pentosaceus WDCM 00158, с коэффициентом извлечения 70-130%.
Также следует проверить эффективность разбавителя. Для подтверждения того, что разбавитель не влияет на выживаемость микроорганизмов, следует использовать такие штаммы, как Escherichia coli WDCM 00012 и Staphylococcus aureus WDCM 00034.
Рекомендации по внедрению и меры предосторожности
Подготовка лаборатории
Вся стеклянная посуда должна быть тщательно очищена и стерилизована, а пластиковая — стерильной. Рекомендуется использовать инкубатор с постоянной температурой, соответствующий DIN 12880, и чашки Петри, соответствующие DIN EN ISO 13132.
Валидация метода
Когда лаборатория впервые использует этот стандарт, она должна провести валидацию метода, включая проверку производительности питательной среды, навыков оператора и воспроизводимости результатов. Рекомендуется регулярно контролировать стабильность процесса тестирования с использованием образцов для контроля качества.
Отчет о результатах
Отчет об испытаниях должен включать: тип образца, источник и идентификацию; метод и дату отбора проб; даты получения и тестирования; количество молочнокислых бактерий (КОЕ/г или мл); любые отклонения от этого стандарта; и количество подсчитанных чашек.
Решение технических трудностей
Для образцов с высоким содержанием загрязняющих веществ рекомендуется использовать модифицированную среду MRS, содержащую сорбиновую кислоту. При низком количестве молочнокислых бактерий можно использовать улучшенный метод обнаружения, покрывая 3-4 чашки по 1 мл образца. Контроль pH имеет решающее значение и должен быть точно отрегулирован до 5,8 ± 0,1 при 50 ° C. pH готовой чашки должен быть 5,6-5,9 (25 ° C).
Применение стандарта
DIN 10109:2016-05 предоставляет мясной промышленности стандартизированный и сопоставимый метод обнаружения молочнокислых бактерий, имеющий большое значение для контроля качества продукции, прогнозирования сроков годности и оптимизации технологических процессов. Этот метод особенно подходит для обнаружения молочнокислых бактерий, растущих в аэробных условиях, включая Lactobacillus, Pediococcus и Leuconostoc, обеспечивая надежную техническую поддержку для мониторинга безопасности пищевых продуктов.
DIN 10109:2016-05 Ссылочный документ
- DIN 12880 Электролабораторное оборудование - Нагревательные печи и инкубаторы
- DIN EN ISO 11133 Микробиология пищевой цепочки, кормов для животных и воды - Подготовка, производство, хранение и испытание сред для культивирования и реагентов (ISO/DIS 11133:2025); немецкоязычная и английская версия prEN ISO 11133:2025*， 2025-08-01 Обновление
- DIN EN ISO 13132 Лабораторная посуда – чашки Петри (ISO 13132:2023)*， 2023-08-01 Обновление
- DIN EN ISO 6887-1 Микробиология пищевой цепи — Подготовка образцов для анализа, исходных суспензий и десятикратных разведений для микробиологического исследования — Часть 1: Общие правила приготовления исходных суспензий и десятикратных разведений (ISO 6887-1:2017 + Amd 1:...*， 2024-12-01 Обновление
- DIN EN ISO 6887-2 Микробиология пищевой цепи. Подготовка тестовых образцов, исходной суспензии и десятичных разбавлений для микробиологического исследования. Часть 2. Специальные правила приготовления мяса и мясных продуктов (ISO 6887-2:2017)*， 2017-07-01 Обновление
DIN 10109:2016-05 История
- 2016 DIN 10109:2016-05 Микробиологический анализ мяса и мясных продуктов. Определение аэробных молочнокислых бактерий. Метод шпателя.
- 2016 DIN 10109:2016 Микробиологический анализ мяса и мясных продуктов. Определение аэробных молочнокислых бактерий. Метод шпателя.
- 1991 DIN 10109:1991 Микробиологический анализ мяса и мясопродуктов; определение аэробных молочнокислых бактерий; метод шпателя (эталонный метод)
- 0000 DIN 10109:1990
