T/SHRH 014-2018
Косметический анализ сенсибилизации кожи in vitro - метод тестирования люциферазы ARE-Nrf2 (Англоязычная версия)
- Стандартный №
- T/SHRH 014-2018
- язык
- Китайский, Доступно на английском
- Дата публикации
- 2018
- Разместил
- Group Standards of the People's Republic of China
- Последняя версия
- T/SHRH 014-2018
- сфера применения
-
Техническое обоснование и развитие стандарта
С полным запретом испытаний на животных в соответствии с Регламентом ЕС о косметике (ЕС) № 1223/2009 альтернативные методы in vitro стали обязательными для оценки безопасности косметических средств. Этот стандарт использует систему генов-репортеров люциферазы, разработанную на основе сигнального пути Keap1-Nrf2-ARE, в сочетании с одобренным ОЭСР методом прямой пептидной реакции (DPRA) для формирования комбинированной стратегии тестирования.
Основной экспериментальный принцип
Трансфицируя линию клеток HaCaT (DSens) плазмидой ARE-люцифераза, можно количественно оценить сигнал флуоресценции, генерируемый при активации аллергеном антиоксидантного пути:
Ключевые элементы Биологические функции Индикаторы обнаружения Транскрипционный фактор Nrf2 Регулирует экспрессию генов антиоксидантов Активность люциферазы Белок Keap1 Сенсор окислительного стресса Порог активации сигнального пути Элемент ARE Последовательность регулятора гена Эффективность экспрессии репортерного гена
Ключевые экспериментальные параметры
Пример: Тест на консервант показал:
- EC1.5=85 мкмоль/л (порог <1000 мкмоль/л)
- IC50=420 мкмоль/л (выживаемость клеток>70%)
- Imax=2,8 раза (>1,5 раза от контрольного значения)
Он соответствует всем условиям для положительного суждения и должен быть всесторонне оценен в сочетании с другими тестами.
Ключевые моменты
- Соблюдайте интервал между поколениями клеток в пределах 25 и регулярно проверяйте стабильность плазмиды
- Показатель EC1.5 положительного контроля циннамальдегида должен находиться в историческом диапазоне 7–30 мкмоль/л
- Используйте анализы CCK-8 или МТТ для одновременного тестирования цитотоксичности
Ограничения метода
Чувствительность анализа для некоторых проаллергенов (таких как соединения, требующие метаболической активации) недостаточна, и для улучшения системы оценки необходимо объединить тест активации линии клеток человека (h-CLAT).
T/SHRH 014-2018 Ссылочный документ
- SN/T 2285 Надлежащая лабораторная практика тестирования альтернативных косметических средств in vitro
T/SHRH 014-2018 История
- 2018 T/SHRH 014-2018 Косметический анализ сенсибилизации кожи in vitro - метод тестирования люциферазы ARE-Nrf2
