Анализ основного содержания стандарта
Настоящий стандарт устанавливает технические характеристики для обнаружения астровируса (HAstV) в пищевых продуктах с использованием цифровой ПЦР-системы с пределом обнаружения 1800 копий/2 г (моллюски) и пределом количественного определения, в 2 раза превышающим предел обнаружения. Основные технические характеристики включают:
| Объекты тестирования | Размер выборки | Предел обнаружения (LOD) | Предел количественного определения (LOQ) |
| Пищеварительные железы моллюсков | 2 г | 1800 копий | 3600 копий |
| Продукты с твердой поверхностью | 100 см² | 1800 копий | 3600 копий |
| Сырые овощи/мягкие фрукты | 25 г | 3600 копий | 7200 копий |
Технические принципы и инновации
Цифровая ПЦР достигает абсолютной количественной оценки путем деления реакционной системы на >10 000 микрореакционных единиц и использования статистики Пуассона. Сравнение с традиционной ПЦР в реальном времени:
- Не требуется стандартная кривая, прямой расчет числа копий
- Более высокая устойчивость к ингибиторам, подходит для сложных пищевых матриц
- Использование бактериофага MS2 в качестве контроля качества процесса (ПК), требуемая степень восстановления ≥1%
Основные рабочие процедуры
Случай обогащения вирусом: обработка мягких фруктов
- Образец 25 г нарезают на кусочки и добавляют к ПК
- Экстракция осцилляцией буфера TGBE (включая обработку пектиназой)
- Осаждение ПЭГ/NaCl для концентрирования вирусных частиц
- Удаление ненуклеиновых кислотных компонентов хлороформом-н-бутанолом
Рекомендации по внедрению
Лабораторные заметки:
- Разделение: Физическая изоляция зон обработки образцов и ПЦР.
- Предотвращение деградации РНК: Используйте расходные материалы без РНКазы на протяжении всего процесса и проводите тестирование в течение 8 часов после экстракции.
- Проверка контроля качества: Каждая партия должна включать пустой контроль, отрицательный контроль и положительный контроль EC РНК.