DIN 10161:2016
Микробиологический анализ мяса и мясных продуктов. Аэробный анализ при 30 °C. Метод капельного посева.
- Стандартный №
- DIN 10161:2016
- Дата публикации
- 2016
- Разместил
- German Institute for Standardization
- состояние
- быть заменен
- DIN 10161 E:2016-04
- Последняя версия
- DIN 10161:2016-12
- заменять
- DIN 10161-2:1984
- сфера применения
-
Обзор стандарта и техническая база
DIN 10161-2 — это стандарт микробиологического исследования мяса и мясных продуктов, разработанный Немецким институтом стандартизации. Он регламентирует метод капельной чашки для подсчета аэробных колоний при температуре 30 °C. Стандарт был первоначально опубликован в феврале 1984 года. В последней версии стандарт был полностью переработан с технической точки зрения и расширено его содержание.
Основные технические изменения
По сравнению с версией 1984 года, в новой версии DIN 10161-2 внесен ряд важных изменений: упрощено название стандарта, добавлены главы с нормативными ссылками, уточнены определения ключевых терминов, добавлены требования к качеству и проверке эксплуатационных характеристик питательных сред, а также внесены всесторонние технические и редакционные изменения.
Сравнительные параметры Издание 1984 года Новая версия стандарта Техническое значение Структура стандарта Базовая структура Полная система Улучшение систематичности и работоспособности Определения терминов Отсутствие четких определений Стандартизированная интерпретация терминовОбеспечение согласованности результатов испытаний Проверка качества Не требуется Обязательная проверка производительности Гарантированное испытание точность Технические характеристики Основные требования Подробные эксплуатационные характеристики Снижение операционной изменчивости Принцип испытания и характеристики метода
Метод капельной пластины основан на неселективной технике посева на питательный агар. Каждая зона инокулируется 0,05 мл раствора образца или разбавления и инкубируется в аэробных условиях при температуре 30 °C в течение 72 часов. Количество аэробных бактерий в образце рассчитывается путем подсчета колониеобразующих единиц (КОЕ).
Этот метод подходит для мяса, мясных продуктов и продуктов, содержащих мясные ингредиенты. Он прост в эксплуатации, недорог и подходит для крупномасштабного тестирования образцов. Чувствительность обнаружения достигает 1,0×10² КОЕ/г(мл), что эффективно отражает микробный гигиенический статус продукта.
Требования к основному оборудованию и реагентам
Характеристики приготовления среды
Стандарт требует использования компонентов среды, подходящих для микробиологических целей. Рекомендуются четко заявленные компоненты среды и аналитически чистые химические вещества или высушенные среды. Конкретная формула включает: 5,0 г пептона, 2,5 г дрожжевого экстракта, 1,0 г безводной глюкозы, 9-18 г агара и воду до 1000 мл.
Регулировка pH имеет решающее значение и должна достигать 7,0±0,2 при измерении при 25°C после стерилизации. После аликвотирования среду необходимо стерилизовать при 121°C±1°C в течение 15 минут. Подготовленные чашки Петри можно хранить при температуре 5°C±3°C до 4 недель.
Требования к приготовлению разбавлений
Стандартная формула разбавителя: 1,0 г пептона, 8,5 г хлорида натрия, 0,75 г агара, добавить воды до 1000 мл. Значение pH после стерилизации должно быть 7,0±0,1. Разбавитель следует хранить при температуре 2-8°C в темноте не более 1 месяца, следя за тем, чтобы объем и состав не изменились.
Проверка характеристик и контроль качества
В новой версии стандарта добавлены требования к проверке характеристик питательной среды, которые должны быть проверены с использованием стандартного штамма для количественного коэффициента продуктивности (PR). Конкретные требования указаны в показателях проверки производительности в таблицах 1 и 2.
Тип среды Тестовый штамм Условия культивирования Критерии приемлемости Агар для подсчета колоний Escherichia coli WDCM 00012 30±1℃,72±3 ч Коэффициент продуктивности ≥0,7 Агар для подсчета колоний Staphylococcus aureus WDCM 00034 30±1℃,72±3 ч Коэффициент продуктивности ≥0,7 Разведение Escherichia coli WDCM 00012 20–25 °C, 45–60 мин Процент выживаемости ≥ 50% Процедура обработки и тестирования образцов
Требования ко времени подготовки образцов
Время от приготовления начального разведения до инокуляции питательной среды не должно превышать 30 минут, чтобы гарантировать сохранение микробной активности. Гомогенизация образца должна выполняться в соответствии с DIN EN ISO 6887-1 и DIN EN ISO 6887-2.
Процедура посева
С помощью стерильной пипетки нанесите 0,05 мл раствора образца или каждого разведения в двух повторностях (инокуляция разных чашек с одинаковым разбавлением) на отмеченные секции на дне чашки. Используйте максимум шесть капель на чашку, начиная с самого большого разбавления.
Ключевые рабочие моменты: Перед отбором проб пипетку следует промыть и слить три раза, чтобы удалить всю прилипшую бактериальную жидкость. При добавлении капель рекомендуется касаться кончиком пипетки поверхности агара, чтобы убедиться, что вся бактериальная жидкость перенесена в питательную среду. Чтобы лучше использовать поверхность питательной среды, можно использовать кончик пипетки для удлинения капли.
Контроль условий культивирования
После инокуляции планшет следует оставить горизонтально, пока бактериальная жидкость слегка не высохнет, затем перевернуть и поместить в инкубатор при температуре 30±1°C на 72 часа. Через 24 и 48 часов инкубации планшет следует осмотреть и при необходимости подсчитать колонии. Планшеты следует инкубировать в течение указанного времени.
Требования к расчету результатов и представлению отчетов
Правила подсчета колоний
Выберите для подсчета разделы, содержащие от 1 до 50 четко разделенных колоний, но по крайней мере один раздел для разбавления должен содержать 5-50 колоний. Для небольших, легко подсчитываемых колоний можно подсчитать до 100 колоний.
Применение формулы расчета
Используется метод расчета средневзвешенного значения: N = ΣC / (n1 + 0,1n2), где ΣC — сумма количества колоний во всех счетных разделах, n1 — номер раздела для наименьшего подсчитываемого разбавления, а n2 — номер раздела для следующего наибольшего разбавления.
Примечание: объем посевного материала на чашке 0,05 мл эквивалентен разбавлению 1:20 содержимого пробирки или колбы, поэтому его необходимо умножить на 20. Окончательный результат выражается как 1,0-9,9, умноженное на соответствующую степень числа 10, с сохранением одного десятичного знака.
Особая обработка результатов
Если два раздела с максимальным объемом посевного материала каждый дают менее 5 колоний, соответствующий результат выдается на основе того, был ли образец разбавлен. Если колонии не растут, предел обнаружения также должен быть указан в определенном формате.
Рекомендации по внедрению и меры предосторожности
Требования к подготовке лаборатории
Вся стеклянная посуда должна быть тщательно очищена и стерилизована перед использованием, а пластиковая посуда должна быть стерильной. В дополнение к оборудованию, требуемому стандартом, также требуются водяная баня с регулируемой температурой 50 °C, инкубатор с температурой 30±1 °C, устройство для охлаждения питательной среды и чашки Петри диаметром приблизительно 90 мм.
Ключевые моменты валидации метода
Лаборатории должны провести валидацию метода перед внедрением данного метода, чтобы гарантировать, что механические пипетки и другое автоматизированное оборудование могут давать сопоставимые результаты. Валидация должна включать такие параметры, как точность, прецизионность, предел обнаружения и предел количественного определения.
Меры обеспечения качества
Создать всеобъемлющую систему обеспечения качества, включая регулярную проверку производительности питательной среды с использованием стандартных штаммов, участие в мероприятиях по проверке квалификации и внедрение программы внутреннего контроля качества. Все отклонения от стандарта должны быть четко указаны в отчете об испытаниях.
Тенденции применения и развития стандарта
Внедрение DIN 10161-2 имеет большое значение для мониторинга безопасности мясных пищевых продуктов. В связи с постоянным развитием технологии микробиологических испытаний метод капельной чашки, как традиционный количественный метод, по-прежнему играет важную роль во многих лабораториях.
Будущие тенденции развития включают: более широкое применение автоматизированного оборудования, дополнительную валидацию методов молекулярной биологии и скоординированное использование методов быстрого обнаружения. Лаборатории должны выбирать соответствующие методы обнаружения, исходя из собственных условий и потребностей в тестировании, а также обеспечивать соответствие требованиям стандарта.
Этот стандарт применим не только к тестированию мясной продукции в Германии, но и обеспечивает техническую основу для микробиологических испытаний в международной торговле, способствуя международному взаимному признанию и сравнению результатов испытаний.
DIN 10161:2016 Ссылочный документ
- DIN EN ISO 11133:2015 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и проверка эффективности питательных сред (ISO 11133:2014, исправленная версия от 01.11.2014); Немецкая версия EN ISO 11133:2014.
- DIN EN ISO 6887-1:1999 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление исследуемых проб, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологического исследования. Часть 1. Общие правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений (I
- DIN EN ISO 6887-2:2004 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка тестовых образцов, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологического исследования. Часть 2. Специальные правила приготовления мяса и мясных продуктов (ISO 6887-2:2003); Немецкая версия
DIN 10161:2016 История
- 2016 DIN 10161:2016-12 Микробиологический анализ мяса и мясных продуктов. Аэробный анализ при 30 °C. Метод капельного посева.
- 2016 DIN 10161 E:2016-04 Микробиологический анализ мяса и мясных продуктов. Аэробный анализ при 30 °C. Метод капельного посева.
- 2016 DIN 10161:2016 Микробиологический анализ мяса и мясных продуктов. Аэробный анализ при 30 °C. Метод капельного посева.
- 1984 DIN 10161-2:1984 Микробиологический анализ мяса и мясопродуктов; аэробное количество при 30 °C; метод капельного покрытия
- 0000 DIN 10161-2:1982
