ASTM F3106-22
Стандартное руководство по анализам дифференцировки остеобластов in vitro

Стандартный №

ASTM F3106-22

Дата публикации

2022

Разместил

American Society for Testing and Materials (ASTM)

Последняя версия

ASTM F3106-22

сфера применения

Анализ стандартной технической структуры

Основные элементы	F3106-14 Старая версия	F3106-22 Новая версия
Концентрация β-глицерофосфата	2–10 мМ широкий диапазон	2,5–4 мМ Точный контроль
Цикл использования дексаметазона	Нет четких пределов	100 нМ в первые 3 недели, 10 нМ в более поздний период
Время приема витамина Добавление D3	Не указано	Через 2 недели культивирования добавьте 10 нМ.

---

Ключевые технические моменты

1. Оптимизация системы культивирования клеток

Стандарт чётко рекомендует использовать среду α-MEM в качестве базовой среды для фазы дифференцировки. Содержащаяся в ней аскорбиновая кислота стимулирует синтез коллагена. Для человеческих мезенхимальных стволовых клеток также подходит среда DMEM с низким содержанием глюкозы, дополненная остеогенными индукционными агентами.

2. Контроль концентрации ключевого реагента

Стабильная концентрация аскорбиновой кислоты-2-фосфата (AA2P) должна поддерживаться на уровне 50 мкМ. Превышение 500 мкМ ингибирует пролиферацию клеток, а превышение 1 мМ приводит к гибели клеток. Рекомендуется использовать β-глицеролфосфат в концентрации 2,5–4 мМ, чтобы избежать артефактов минерализации, не связанных с клетками.

---

Рекомендации по внедрению

1. Многоиндикаторная валидация: Для тестирования отложения кальция требуется комбинация анализа экспрессии генов щелочной фосфатазы, остеокальцина и других генов.
2. Валидация партии сыворотки: Различные партии сыворотки плода крупного рогатого скота могут влиять на эффективность минерализации до 30%.
3. Контроль пассажа клеток: Первичные клетки или клетки пассажа 4 или ниже достигают оптимальной дифференциации.

---

Стандартный эволюционный анализ

Основные изменения в издании 2022 года включают: ① Добавление спецификаций для последовательного добавления витамина D3; ② Уточнение контроля градиента концентрации дексаметазона; и ③ Усиление идентификации артефактов минерализации, не связанных с остеобластами. Эти улучшения повышают экспериментальную воспроизводимость примерно на 40%.

ASTM F3106-22 Ссылочный документ

• ASTM F2312 Стандартная терминология, относящаяся к медицинским изделиям тканевой инженерии*， 2024-10-01 Обновление
• ASTM F2944 Стандартная практика автоматического анализа колониеобразующих единиц (КОЕ) — метод получения изображений и анализа для подсчета и характеристики клеток и колоний в культуре
• ASTM F2997 Стандартная практика количественного определения отложений кальция в остеогенной культуре клеток-предшественников с использованием анализа флуоресцентных изображений*， 2025-10-23 Обновление
• ISO 21709 Биотехнология - Биобанкинг - Требования к процессу и качеству создания, поддержания и характеристики линий клеток млекопитающих; Поправка 1

ASTM F3106-22 История

• 2022 ASTM F3106-22 Стандартное руководство по анализам дифференцировки остеобластов in vitro
• 2014 ASTM F3106-14 Стандартное руководство по анализам дифференцировки остеобластов in vitro

Специальные темы по стандартам и нормам

стандарты и спецификации