SN/T 5364.4-2021
Метод выявления патогенных бактерий в пищевых продуктах на экспорт. Часть 4: Vibrio vulnificus. (Англоязычная версия)

Стандартный №

SN/T 5364.4-2021

язык

Китайский, Доступно на английском

Дата публикации

2021

Разместил

Professional Standard - Commodity Inspection

Последняя версия

SN/T 5364.4-2021

сфера применения

Техническое обоснование и развитие стандарта

Настоящий стандарт, часть 4 серии SN/T 5364, знаменует собой развитие в моей стране технологии обнаружения патогенов в пищевых продуктах для экспорта, перейдя от традиционных методов культивирования к молекулярным методам. Технология цифровой капельной ПЦР (ddPCR) обеспечивает абсолютное количественное определение молекул нуклеиновых кислот благодаря системе генерации капель, обеспечивая более высокую чувствительность и улучшенную устойчивость к помехам по сравнению с традиционной ПЦР.

---

Основной принцип обнаружения

Технические элементы	Требования к параметрам	Сравнение с традиционной ПЦР
Целевой ген	Консервативная последовательность гена MET	Универсальная 16S рРНК
Предел обнаружения	1-5 КОЕ/25 г(мл)	10²-10³ КОЕ
Количество капель	10 000-20 000	Не Применимо

---

Основные рабочие характеристики

Предварительная обработка образца: Бактерии должны быть обогащены строго в соответствии с NMKL № 156. После центрифугирования образец следует ресуспендировать в фосфатном буферном растворе и обработать ферментом, удаляющим нуклеазу, для устранения влияния окружающей ДНК.

Система контроля качества: Требуются три контроля (положительный, отрицательный и пустой). Положительный контроль должен использовать фрагмент ДНК, содержащий ген met, а отрицательный контроль — ДНК Escherichia coli.

---

Рекомендации по внедрению

1. Калибровка оборудования: Регулярно проверяйте скорости нагрева и охлаждения усилителя ddPCR (требуется 1 °C/с)
2. Профилактика и контроль загрязнения: Экспериментальное разделение должно строго соответствовать требованиям Приложения D GB/T 27403-2008
3. Интерпретация данных: Установка порога должна обеспечивать четкое разделение кластеров отрицательных/положительных капель (канал FAM)

---

Анализ технических преимуществ

Этот метод дискретизирует систему реакции с помощью технологии разделения капель, эффективно преодолевая ингибирующее действие пищевой матрицы. Специфичные для гена мет праймеры (VV-F/R) и зонд (VV-P), представленные в Приложении А, были проверены последовательностями GenBank и позволяют точно отличить Vibrio vulnificus от других видов Vibrio.