ISO/TS 21872-2:2020
Микробиология пищевой цепи. Горизонтальный метод определения Vibrio spp. — Часть 2. Подсчет общего количества и потенциально энтеропатогенных Vibrio parahaemolyticus в морепродуктах с использованием нуклеинового

Стандартный №

ISO/TS 21872-2:2020

Дата публикации

2020

Разместил

International Organization for Standardization (ISO)

Последняя версия

ISO/TS 21872-2:2020

сфера применения

Анализ содержимого стандартного ядра

Цель обнаружения	Тип зонда	Чувствительность (КОЕ/г)	Специфичность
Общее количество Vibrio parahaemolyticus	Зонд гена toxR	10(ПО)/100(ПКО)	99,4%
Патогенные штаммы	Зонд гена tdh/trh	10(ПО)/100(ПКО)	96,7–97,8%

---

Основные технологические инновации

В этом стандарте используется технология гибридизации нуклеиновых кислот для достижения прорыва в тройном обнаружении:

1. Одновременное обнаружение общего количества колоний (ген toxR) и патогенных бактерий (ген tdh/trh)
2. При использовании олигонуклеотидных зондов, меченных DIG, чувствительность достигает 10⁶–10⁷ копий гена
3. Оптимизация системы гибридизационного буфера (содержащей 36% мочевины) для повышения специфичности

---

Основные этапы работы

Процедура обработки образца

• Среда TSA-S Посев на чашку Петри (37℃ 18–24 ч)
• ATCC 43996 (контроль tdh+)
• CCUG 43364 (контроль trh+)

---

Требования к контролю качества

Стандартный контроль штамма

• ATCC 43996 (контроль tdh+)
• CCUG 43364 (контроль trh+)
• WDCM 00185 (отрицательный контроль)

Критерии достоверности данных

Обязательно Соответствовать следующим требованиям:

1. Корректный цвет штамма контроля процесса
2. Чистый сигнал контроля гибридизации
3. Нормальный цвет контроля обнаружения

---

Технические ограничения

Примечание:

• Гены Tdh/trh могут существовать и у других видов Vibrio (например, Vibrio alginolyticus)
• У клинических изолятов могут быть патогенные механизмы, не зависящие от tdh/trh
• Положительный результат генного теста не означает экспрессию токсина

Рекомендации по внедрению

Подготовка лаборатории

1. Проверьте выход энергии УФ-сшивателя (рекомендуется использовать калибровку Stratalinker 1800)
2. Разработать процедуры тестирования стабильности зондов (хранение при -20 °C ≤ 6 месяцев)
3. Обучить персонал методам переноса мембран (уровень целостности колоний ≥ 95%)

Направления оптимизации метода

• Сочетание ПЦР в реальном времени для проверки результатов
• Разработка системы обнаружения мультиплексной гибридизации
• Создание системы цифровой интерпретации результатов

ISO/TS 21872-2:2020 Ссылочный документ

• ISO 11133 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и проверка эффективности питательных сред. ПОПРАВКА 1
• ISO 6887-1 Микробиология пищевой цепи*， 2024-03-01 Обновление
• ISO 6887-3 Микробиология пищевой цепи. Подготовка проб для испытаний, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологического исследования. Часть 3. Специальные правила приготовления рыбы и рыболовства.
• ISO 7218 Микробиология пищевой цепи. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям*， 2024-01-01 Обновление

ISO/TS 21872-2:2020 История

• 2020 ISO/TS 21872-2:2020 Микробиология пищевой цепи. Горизонтальный метод определения Vibrio spp. — Часть 2. Подсчет общего количества и потенциально энтеропатогенных Vibrio parahaemolyticus в морепродуктах с использованием нуклеинового
• 2007 ISO/TS 21872-2:2007 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных - Горизонтальный метод обнаружения потенциально энтеропатогенных Vibrio spp. - Часть 2: Обнаружение видов, отличных от Vibrio parahaemolyticus и Vibrio cholerae.

стандарты и спецификации