NY/T 3421-2019 (Англоязычная версия) Метод флуоресцентной количественной ПЦР для обнаружения вируса ядерного полиэдроза тутового шелкопряда - Стандарты и спецификации PDF

NY/T 3421-2019
Метод флуоресцентной количественной ПЦР для обнаружения вируса ядерного полиэдроза тутового шелкопряда (Англоязычная версия)

Стандартный №
NY/T 3421-2019
язык
Китайский, Доступно на английском
Дата публикации
2019
Разместил
Professional Standard - Agriculture
Последняя версия
NY/T 3421-2019
 
сфера применения

Техническое обоснование стандарта

Настоящий стандарт был разработан для устранения серьёзной угрозы, которую представляет вирус ядерного полиэдроза (BmNPV) Bombyx mori (Bombyx sericulture) в шелководстве. Он использует технологию количественной ПЦР в реальном времени для точного обнаружения вируса. Этот технологический прогресс, от традиционного микроскопического наблюдения до молекулярной детекции, повысил чувствительность более чем в 1000 раз.

Процесс определения ядра

ШагиКлючевые параметрыТочки контроля качества
Сбор образцовКоличество крови/ткани: 50–100 мгБыстрая заморозка в жидком азоте
Извлечение ДНКA260/A280=1,75–1,85Расщепление протеиназой К
ПЦР-амплификация40 циклов (95℃/60℃)Значение Ct Интерпретация

Ключевые технические параметры

Конструкция праймера: Нацелен на ген gz64 (регистрационный номер GenBank: XXX), длина продукта составляет 187 п.н. На практике группа из Университета Сучжоу подтвердила, что эти праймеры обеспечивают 100%-ную детектируемость 15 штаммов BmNPV. Положительный контроль: Требуемое количество копий рекомбинантной плазмиды составляло 1,0×104 клеток/мкл. Эксперименты в Южно-Китайском сельскохозяйственном университете показали, что эта концентрация стабильно обеспечивает значение Ct 28±1.

Рекомендации по внедрению

  1. В лаборатории необходимо установить трехуровневую меру защиты от загрязнения: независимую зону экстракции нуклеиновых кислот, зону подготовки ПЦР и зону анализа амплификации
  2. Рекомендуется добавлять внутренние референтные гены (например, ген актина шелкопряда) в каждую партию тестирования для контроля эффективности экстракции
  3. Образцы с критическими значениями (значения Ct между положительным и отрицательным) следует повторно тестировать и дополнять проверкой электрофорезом

Сравнительный анализ стандартов

ИндикаторыДанный стандартТрадиционный метод ПЦРЭлектронный микроскопия
Чувствительность10 копий/мкл1000 копий/мкл105 вирусных частиц
Требуемое время2 часа4 часа24 часа
Количественная способностьДаНетНет

NY/T 3421-2019 История

  • 2019 NY/T 3421-2019 Метод флуоресцентной количественной ПЦР для обнаружения вируса ядерного полиэдроза тутового шелкопряда
Метод флуоресцентной количественной ПЦР для обнаружения вируса ядерного полиэдроза тутового шелкопряда

Специальные темы по стандартам и нормам

мультиплексная флуоресцентная количественная ПЦР Значение флуоресценции Значение флуоресценции Флуоресцентный количественный мультиплекс ПЦР мультиплексная флуоресцентная количественная ПЦР Флуоресцентный количественный ПЦР-мультиплекс Флуоресцентная количественная мультиплексная ПЦР Мультиплексная количественная флуоресцентная ПЦР мультиплексная флуоресцентная количественная ПЦР Мультиплексная флуоресцентная количественная ПЦР в реальном времени Мультиплексная флуоресцентная количественная ПЦР в реальном времени Мультиплексная ПЦР и флуоресцентная количественная ПЦР

стандарты и спецификации

AWWA WQTC65810 Захват клеток-хозяев. Количественная ПЦР. Обнаружение вирусов 农业部2259号公告-5-2015 Обнаружение генетически модифицированных организмов и продуктов их переработки. Технические рекомендации по разработке методов количественной ПЦР в реальном ISO/TS 16099:2025 Качество воды — Полимеразная цепная реакция (ПЦР) для обнаружения и количественного определения микроорганизмов и вирусов — Общие требования, гарантия качества AWWA WQTC57055 Использование молекулярных методов в рутинном лабораторном примере обнаружения вирусов в образцах ила 农业部2259号公告-1-2015 Обнаружение генетически модифицированных растений и продуктов их переработки. Техническая спецификация сертифицированной оценки ценности матричных стандартных CEN ISO/TS 15216-1:2013 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод определения вируса гепатита А и норовируса в пищевых продуктах с использованием ISO/TS 15216-1:2013 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод определения вируса гепатита А и норовируса в пищевых продуктах с использованием ISO/TS 20224-2:2020 Анализ молекулярных биомаркеров. Обнаружение материалов животного происхождения в пищевых продуктах и кормах с помощью ПЦР в реальном времени. Часть 2. Метод ISO/TS 20224-4:2020 Анализ молекулярных биомаркеров. Обнаружение материалов животного происхождения в пищевых продуктах и кормах с помощью ПЦР в реальном времени. Часть 4. Метод SS-EN ISO 15216-1:2017 Микробиология пищевой цепи. Горизонтальный метод определения вируса гепатита А и норовируса с использованием ОТ-ПЦР в реальном времени. Часть 1. Метод


© 2025. Все права защищены.