DIN EN ISO 6888-1:2019
Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод подсчета коагулазоположительных стафилококков (Staphylococcus aureus и других видов). Часть 1. Методика использования агаризованной среды Бэрда-Паркера (ISO 6888-1:1999 + Amd 1:2003 + Amd). 2:2

Стандартный №: DIN EN ISO 6888-1:2019
Дата публикации: 2019
Разместил: German Institute for Standardization
состояние: быть заменен
быть заменен: DIN EN ISO 6888-1:2019-06
Последняя версия: DIN EN ISO 6888-1:2024-03

сфера применения

Обзор стандарта и его техническое развитие

DIN EN ISO 6888-1:2019 — ключевой стандарт в области микробиологии пищевых продуктов и кормов, заменивший издание 2003 года. Этот стандарт определяет горизонтальный метод подсчёта коагулазоположительных стафилококков (включая Staphylococcus aureus и другие виды) с использованием агара Бэрда-Паркера. В редакции 2018 года (A2:2018) были представлены ключевые технические новшества, в частности, добавление фибриноген-агара с кроличьей плазмой (RPFA) в качестве альтернативного подтверждающего теста.

Основные технические изменения

По сравнению с изданием 2003 года, издание стандарта 2019 года претерпело пять важных изменений:

Элементы редакции	Издание 2003 года	Издание 2019 года	Техническое значение
Нормативные ссылки	ISO 11133:2003	Обновлено до последней версии	Адаптировано к разработке стандартов приготовления питательных сред
Питательная среда для подтверждающего теста	Тест на коагулазу в пробирке только	Добавлен метод пластинчатого RPFA	Обеспечивает более быстрый и простой метод подтверждения
Характеристики водяной бани	47°C	Регулируемый 47-50°C	Увеличивает гибкость в контроле температуры
Контроль качества питательной среды	Основные требования	Подробные спецификации испытаний производительности	Гарантирует точность результатов испытаний
Ссылки	Старые ссылки	Обновлено в соответствии с последними результатами исследований	Отражает технический прогресс

Спецификация приготовления агаризованной среды Бэрда-Паркера

В стандарте подробно описаны требования к приготовлению агара Бэрда-Паркера:

Состав базовой среды

На 1000 мл среда содержит: 10,0 г панкреатического казеина, 1,0 г дрожжевого экстракта, 5,0 г мясного экстракта, 10,0 г пирувата натрия, 12,0 г L-глицина, 5,0 г хлорида лития и 12–22 г агара (с корректировкой в зависимости от свойств геля). pH после стерилизации должен составлять 7,2 ± 0,2 (измерено при 25 °C).

Приготовление основных добавок

Раствор теллурита калия: Растворите 1,0 г теллурита калия в 100 мл воды и стерилизуйте фильтрацией через мембрану 0,22 мкм. Удалите любой белый нерастворимый остаток. Раствор следует хранить при температуре 3°C ± 2°C не более одного месяца.

Эмульсия яичного желтка: Стерилизуйте свежие яйца и удалите желток. Смешайте с 4 объемами стерильной воды, нагревайте при температуре 47°C в течение 2 часов, затем дайте отстояться при температуре 3°C ± 2°C в течение 18–24 часов. Надосадочную жидкость следует использовать и хранить не более 72 часов.

Технические инновации среды RPFA

Наиболее значительным нововведением в пересмотре 2018 года является введение среды агаризованной с фибриногеном кроличьей плазмы (RPFA) в качестве альтернативного метода подтверждения для теста на коагулазу:

Состав RPFA

90 мл базальной среды + 0,25 мл раствора теллурита калия + 7,5 мл раствора бычьего фибриногена + 2,5 мл раствора кроличьей плазмы и ингибитора трипсина. Во время приготовления базальную среду необходимо охладить до 47–50 °C. Каждый раствор необходимо предварительно нагреть до 48 °C ± 1 °C и добавлять асептически, чтобы избежать осаждения плазмы.

Требования к качеству работы

Тип теста	Контрольный штамм	Условия культивирования	Ожидаемые результаты
Производительность	Staphylococcus aureus WDCM 00034	37°C 24-48 ч	Хороший рост (класс 2)
Селективность	Escherichia coli WDCM 00032	37°C 48 ч	Полное ингибирование
Специфичность	Staphylococcus saprophyticus WDCM 00012	37°C в течение 24-48 часов	Черно-серые колонии без ореолов

Процедура проведения теста и расчет результатов

Посев образцов и инкубация

Жидкие образцы следует инокулировать непосредственно 0,1 мл раствора для анализа. Нежидкие образцы следует инокулировать разбавлением 10⁻¹. Следует использовать метод поверхностного посева с дубликатами для каждого разбавления. Чашки следует инкубировать аэробно при 35°C или 37°C в течение 24 ± 2 часов и 48 ± 2 часов.

Характеристики идентификации колоний

Типичные колонии: Черные или серые, блестящие и приподнятые (1–1,5 мм в диаметре через 24 часа, 1,5–2,5 мм в диаметре через 48 часов), окруженные прозрачной зоной, которая может быть частично мутной. В месте соприкосновения колонии может появиться молочный ореол. Атипичные колонии: Схожие по размеру с типичными колониями, они могут иметь блестящую черную полосу или не иметь узкой белой границы, невидимую или труднонаблюдаемую прозрачную зону, невидимый или труднонаблюдаемый опалесцирующий ореол или серые колонии без прозрачной зоны. Варианты подтверждающих тестов: Стандарт предусматривает два метода подтверждения: традиционный пробирочный коагулазный тест и пластинчатый RPFA-анализ. Анализ в пробирке включает инокуляцию колоний бульоном с сердечно-мозговым экстрактом, культивирование в течение 24 ± 2 часов, затем смешивание 0,1 мл культуры с 0,3 мл плазмы кролика. Анализ инкубируют при температуре 35 °C или 37 °C в течение 4-6 часов и 24 часов, а затем наблюдают за коагуляцией. Анализ на пластине RPFA использует пункционную инокуляцию и наблюдают за образованием ореола через 24-48 часов инкубации.

Формула расчета результата

Формула расчета: a = (b_c × c_c / A_c) + (b_nc × c_nc / A_nc)

Где: a - количество коагулазоположительных стафилококков, подтвержденных на каждой пластине; b_c - количество типичных коагулазоположительных колоний; b_nc — количество атипичных коагулазоположительных колоний; c_c — общее количество типичных колоний на чашке; c_nc — общее количество атипичных колоний на чашке; A_c — количество протестированных типичных колоний; A_nc — количество протестированных атипичных колоний.

Данные о точности метода

Предел повторяемости (r)

Образцы пищевых продуктов: r=0,28 (логарифмическая разница шкалы) или r=1,9 (нормальное отношение шкалы)

Эталонный материал (капсулы приблизительно 5000 КОЕ): r=0,19 или r=1,55

Предел воспроизводимости (R)

Образцы пищевых продуктов: R=0,43 или R=2,7

Эталонный материал: R=0,39 или R=2,4

Эти данные о точности основаны на международном исследовании оценки воздействия на окружающую среду 1999 года, включавшем различные матрицы, такие как сыр, мясо и яичный порошок, и были рассчитаны с использованием надежных статистических методов, указанных в ISO 16140.

Область применения и ограничения стандарта

Настоящий стандарт применим для количественного обнаружения коагулазоположительных стафилококков в пищевых продуктах и кормах. Однако из-за разнообразия пищевых продуктов и кормов для отдельных продуктов могут потребоваться различные специфические методы. В таких случаях следует максимально точно следовать основным принципам данного уровня метода.

В стандарте четко указано, что оба метода (Часть 1 и Часть 2) эквивалентны. Метод Части 2 рекомендуется для пищевых продуктов, которые могут быть загрязнены стафилококками, образующими атипичные колонии на агаре Бэрда-Паркера, или в случаях, когда сопутствующая флора может покрывать целевые колонии.

При принятии настоящего стандарта лаборатории должны разработать соответствующие процедуры контроля качества, включая использование референтных штаммов для проверки эффективности питательной среды, участие в мероприятиях по проверке квалификации и регулярное проведение валидации метода для обеспечения точности и надежности результатов испытаний.

DIN EN ISO 6888-1:2019 История

2024 DIN EN ISO 6888-1:2024-03 Микробиология пищевой цепи. Горизонтальный метод подсчета коагулазоположительных стафилококков (Staphylococcus aureus и других видов). Часть 1. Метод с использованием агаризованной среды Бэрда-Паркера (ISO 6888-1:2021 + Amd 1:2023); Немецкая версия EN ISO 6...
2024 DIN EN ISO 6888-1:2024 Микробиология пищевой цепи. Горизонтальный метод подсчета коагулазоположительных стафилококков (Staphylococcus aureus и других видов). Часть 1. Метод с использованием агаризованной среды Бэрда-Паркера (ISO 6888-1:2021 + Поправка 1:2023) (включает поправку) А1:2...
2023 DIN EN ISO 6888-1/A1:2023-01 Микробиология пищевой цепи. Горизонтальный метод подсчета коагулазоположительных стафилококков (Staphylococcus aureus и других видов). Часть 1. Метод с использованием агаризованной среды Бэрда-Паркера. ПОПРАВКА 1. Исправления (ISO 6888-1:2021/DAM 1: 2022)...
2022 DIN EN ISO 6888-1:2022-06 Микробиология пищевой цепи. Горизонтальный метод подсчета коагулазоположительных стафилококков (Staphylococcus aureus и других видов). Часть 1. Метод с использованием агаризованной среды Бэрда-Паркера (ISO 6888-1:2021).
2022 DIN EN ISO 6888-1:2022-02 Микробиология пищевой цепочки. Горизонтальный метод для количественного определения коагулазопозитивных стафилококков (Staphylococcus aureus и другие виды). Часть 1: Метод, использующий среду Бейрд-Паркер (ISO 6888-1:2021)
2021 DIN EN ISO 6888-1:2022 Микробиология пищевой цепи. Горизонтальный метод подсчета коагулазоположительных стафилококков (Staphylococcus aureus и других видов). Часть 1. Метод с использованием агаризованной среды Бэрда-Паркера (ISO 6888-1:2021); Немецкая версия EN ISO 6888-1:2021
2020 DIN EN ISO 6888-1:2020-04 Проект документа - Микробиология пищевой цепи - Горизонтальный метод подсчета коагулазоположительных стафилококков (Staphylococcus aureus и другие виды) - Часть 1: Методика с использованием агаровой среды Бэрда-Паркера (ISO/DIS 6888-1:2020); немецкий и английский...
2020 DIN EN ISO 6888-1:2020 Микробиология пищевой цепи. Горизонтальный метод подсчета коагулазоположительных стафилококков (Staphylococcus aureus и других видов). Часть 1. Методика с использованием агаризованной среды Бэрда-Паркера (ISO/DIS 6888-1:2020); Немецкая и английская версия prEN
2019 DIN EN ISO 6888-1:2019-06 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод подсчета коагулазоположительных стафилококков (Staphylococcus aureus и другие виды). Часть 1. Методика с использованием агаризованной среды Бэрда-Паркера (ISO 6888-1:1999 + Amd 1:2003 + Amd ...
2019 DIN EN ISO 6888-1:2019 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод подсчета коагулазоположительных стафилококков (Staphylococcus aureus и других видов). Часть 1. Методика использования агаризованной среды Бэрда-Паркера (ISO 6888-1:1999 + Amd 1:2003 + Amd). 2:2
2017 DIN EN ISO 6888-1/A2 E:2017-04 Проект документа - Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных - Горизонтальный метод подсчета коагулазоположительных стафилококков (Staphylococcus aureus и другие виды) - Часть 1: Методика с использованием агаровой среды Бэрда-Паркера - Поправка 2: Вкл...
2017 DIN EN ISO 6888-1/A2:2017 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод подсчета коагулазоположительных стафилококков (Staphylococcus aureus и других видов). Часть 1. Методика использования агаризованной среды Бэрда-Паркера. Поправка 2. Включение альтернативы.
2003 DIN EN ISO 6888-1:2003-12 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных — Горизонтальный метод подсчета коагулазопозитивных стафилококков (Staphylococcus aureus и другие виды) — Часть 1: Техника, использующая среду Бред-Паркер (ISO 6888-1:1999 + AMD 1:2003)
2003 DIN EN ISO 6888-1:2003 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод подсчета коагулазоположительных стафилококков (Staphylococcus aureus и других видов). Часть 1. Методика с использованием агаризованной среды Бэрда-Паркера (ISO 6888-1:1999 + AMD 1:2003); Немецкий
1970 DIN EN ISO 6888-1:1970

Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод подсчета коагулазоположительных стафилококков (Staphylococcus aureus и других видов). Часть 1. Методика использования агаризованной среды Бэрда-Паркера (ISO 6888-1:1999 + Amd 1:2003 + Amd). 2:2

стандарты и спецификации