SN/T 5364.5-2021
Метод выявления патогенных бактерий в пищевых продуктах на экспорт. Часть 5: Золотистый стафилококк. (Англоязычная версия)
- Стандартный №
- SN/T 5364.5-2021
- язык
- Китайский, Доступно на английском
- Дата публикации
- 2021
- Разместил
- Professional Standard - Commodity Inspection
- Последняя версия
- SN/T 5364.5-2021
- сфера применения
-
Техническое обоснование и эволюция стандарта
Являясь ключевым компонентом системы отраслевых стандартов контроля ввоза-вывоза и карантина, этот стандарт знаменует собой значительный прогресс в технологии микробиологического тестирования пищевых продуктов в моей стране, переходя от традиционных методов культивирования к подходам молекулярной биологии. По сравнению с методом культивирования, предписанным в GB 4789.10-2016, технология цифровой капельной ПЦР повышает чувствительность обнаружения до 1-5 КОЕ/25 г, сокращая время обнаружения с 5-7 дней до 24 часов.
Принцип обнаружения ядра
Метод основан на технологии разделения капель, которая делит реакционную систему на 20 000 капель для независимой амплификации:
Технические элементы Требования к параметрам Точки контроля качества Целевой ген Консервативная последовательность гена nuc Зонд, меченый FAM/BHQ1 Эффективность амплификации Скорость генерации капель ≥85% Эффективное число капель ≥10 000 Параметры циклирования 45 циклов при 52,5 ℃ Скорость нагрева и охлаждения 1 ℃/с
Основные рабочие характеристики
Подготовка образца
Этапы удаления нуклеазы (37 ℃ 15–30 мин) и расщепления стафилококковой лиазой должны строго соблюдаться для исключения помех со стороны ДНК окружающей среды.
Конфигурация системы реакции
- Конечная концентрация праймера: 0,75 мкМ (SA-F/SA-R)
- Конечная концентрация зонда: 0,25 мкМ (SA-P)
- Требования к чистоте ДНК-матрицы: A260/A280=1,8-2,0
Предложения по внедрению
Случай: После применения этого метода компания, экспортирующая молочную продукцию, снизила уровень ложноположительных результатов с 12% по сравнению с традиционным методом до 2,3%, в основном благодаря:
- Предварительной обработке свободной нуклеазой Bio-Rad
- Строгому установлению пороговых значений для различения положительных и отрицательных кластеров капель
- Трехпараллельному механизму обнаружения
Решения распространённых проблем
Аномальное явление Возможная причина Меры по устранению Недостаточное образование капель Аномальная вязкость системы Проверьте чистоту ДНК и повторно извлеките Наложение положительных и отрицательных кластеров Неправильная настройка порогового значения Скорректируйте пороговое значение, обратившись к пустому контролю
SN/T 5364.5-2021 Ссылочный документ
- GB 4789.10 Национальный стандарт безопасности пищевых продуктов, тест на пищевую микробиологию, тест на золотистый стафилококк
- GB/T 27403-2008 Критерий контроля качества лабораторий. Молекулярно-биологическое тестирование пищевых продуктов.
- GB/T 6682 Вода для аналитических лабораторий. Спецификация и методы испытаний.
SN/T 5364.5-2021 История
- 2021 SN/T 5364.5-2021 Метод выявления патогенных бактерий в пищевых продуктах на экспорт. Часть 5: Золотистый стафилококк.
