DIN EN 15842:2019
Пищевые продукты. Обнаружение пищевых аллергенов. Общие соображения и валидация методов.

Стандартный №

DIN EN 15842:2019

Дата публикации

2019

Разместил

German Institute for Standardization

состояние

быть заменен

быть заменен

DIN EN 15842:2019-12

Последняя версия

DIN EN 15842:2019-12

сфера применения

Обзор стандарта и история пересмотра

DIN EN 15842:2019 — это общий стандарт для определения пищевых аллергенов, опубликованный Европейским комитетом по стандартизации (CEN), заменивший издание 2010 года. Этот стандарт был разработан Техническим комитетом CEN/TC 275 «Анализ пищевых продуктов — горизонтальные методы» при поддержке Германского института стандартизации (DIN) в качестве секретариата. Новая версия стандарта была принята CEN 12 августа 2019 года, а немецкая версия была опубликована в декабре 2019 года.

Настоящий стандарт в первую очередь фокусируется на иммуноферментном анализе, хроматографии и методах определения пищевых аллергенов на основе нуклеиновых кислот, но в связи с быстрыми темпами технологических изменений в этой области рассматриваются и другие технические методы. Стандарт содержит подробные инструкции от получения лабораторных образцов до окончательных результатов, но не рассматривает отбор проб.

---

Основные технические изменения

По сравнению с изданием 2010 года стандарт DIN EN 15842:2019 включает в себя следующие существенные технические изменения:

Изменения	Издание 2010 года	Издание 2019 года	Значимость изменений
Нормативные ссылки	Включить ссылки	Удалить все ссылки в разделе 2	Упростить структуру стандарта для предотвращения конфликтов версий
Определения терминов	Основные Терминология	Полностью обновлен раздел 3 Терминология	Адаптация к технологическому развитию и повышение точности
Требования к стандартным образцам	Включение требований к производству и хранению	Удаление требований к производству и хранению стандартных образцов (4.3)	Сосредоточение на основных требованиях к тестированию
Требования к обеспечению качества	Независимая глава	Удаление главы «Требования к обеспечению качества»	Совместимость с гармонизацией ISO/IEC 17025
Требования к отчету об испытаниях	Общие требования	Указание соответствия EN ISO/IEC 17025	Повышение уверенности в тестировании результаты

---

Ключевые термины и эксплуатационные характеристики

Определения эксплуатационных характеристик метода

Стандарт определяет 21 ключевой термин эксплуатационных характеристик, предоставляя унифицированный технический язык для валидации метода:

Предел обнаружения (ПО): Наименьшее количество или концентрация аналита в образце, которые могут быть надежно обнаружены, но не обязательно количественно определены, как показано в ходе межлабораторного тестирования или другой подходящей валидации.

Предел количественного определения (ПКО): Наименьшая концентрация или количество аналита в образце, которые могут быть количественно определены с приемлемой точностью и достоверностью.

Точность: Близость соответствия между независимыми результатами, полученными в заданных условиях, определяемая исключительно распределением случайной погрешности. Истинность: Близость соответствия между математическим ожиданием результата испытания или измерения и истинным значением. Точность: Близость соответствия между результатом испытания или измерения и истинным значением, сочетание правильности и прецизионности. Настоящий стандарт определяет ключевые понятия, такие как стандартный материал (RM) и сертифицированный стандартный материал (CRM): Сертифицированный стандартный материал (CRM): Стандартный материал, характеризуемый метрологически обоснованными процедурами для одного или нескольких указанных свойств и сопровождаемый сертификатом RM, в котором указано значение указанного свойства, связанная неопределенность и заявление о метрологической прослеживаемости. Взаимозаменяемость: Свойство стандартного материала, демонстрируемое близостью соответствия между отношением результатов измерения конкретной величины, определенной в этом материале двумя заданными методами измерения, и отношением результатов измерения, определенных для другого указанного материала. Характеристики аналитического метода: Методы иммуноанализа: Методы, основанные на иммуноанализе, используют моноклональные или поликлональные антитела для обнаружения белков. Сродство антитела к белку зависит от конформации белка после экстракции. Специфичность используемого антитела должна быть подтверждена (например, отсутствие перекрестной реактивности). Методы скрининга могут использоваться для оценки наличия аллергена в продукте на основе наличия экспрессируемых белков. Примерами таких методов являются тест-полоски с латеральным потоком, качественный ИФА, биосенсоры и белковые микрочипы. Количественное определение пищевых аллергенов может быть выполнено с использованием методов, основанных на белках, таких как ИФА. Этот метод должен быть валидирован для анализируемой матрицы. Должны быть доступны стандарты для построения стандартной кривой, по которой рассчитывается содержание белка в исследуемом образце. Методы молекулярной биологии Специфичность аналитических методов, использующих ДНК в качестве мишени для определения наличия аллергена, зависит от специфических свойств целевой последовательности ДНК. Примерами методов, основанных на нуклеиновых кислотах, являются ПЦР, ПЦР в реальном времени, ПЦР-ИФА, микрочипы и чиповые технологии. Методы обнаружения с помощью масс-спектрометрии Белки/аллергены или маркеры извлекаются из матрицы и ферментативно расщепляются для получения пептидов, которые затем вводятся в хроматографическую систему. Использование масс-спектрометрии в качестве системы обнаружения является предпочтительным, поскольку она может подтвердить идентичность введенных химических видов пищевых аллергенов на основе их типичных паттернов фрагментации.

---

Требования к организации и проектированию лаборатории

Принципы проектирования лаборатории

Известно, что случайное загрязнение происходит через диффузию пыли и аэрозолей. Поэтому организация рабочих зон в лаборатории должна быть логически основана на:

а) систематическом разделении последовательных методологических этапов работы, связанных с определением результатов;

б) принципе «однонаправленного потока» при обработке образцов.

Требования к оборудованию и реагентам

В лаборатории должно использоваться надлежащим образом обслуживаемое оборудование, соответствующее применяемым методам. Помимо основного лабораторного оборудования, дополнительное оборудование описано в соответствующих разделах конкретных стандартов.

Оборудование и аппаратура должны обслуживаться в соответствии с инструкциями производителя. Условия хранения и сроки годности реагентов должны быть четко указаны.

---

Требования к валидации и внедрению метода

Подготовка и экстракция образца

Инструкции по подготовке образца для анализа должны быть четко указаны в каждом методе. Соответствующие условия экстракции/разбавления исследуемой порции или контрольных и стандартных материалов известной концентрации должны быть подробно описаны в инструкции по применению.

Построение калибровочной кривой

Необходимо использовать все стандарты, предоставленные с тестом. При необходимости и доступности следует использовать адаптированные к матрице стандарты.

Оценка результатов и отчетность

Параметры, подлежащие оценке, зависят от того, является ли тест качественным или нет. Отсутствие целевого аналита в анализируемом образце не должно быть указано. Отрицательные результаты должны быть представлены как «не обнаружено на пределе обнаружения» или «ниже предела обнаружения».

Положительные результаты ниже предела количественного определения должны быть представлены как «положительный выше предела обнаружения, но ниже предела количественного определения». Все окончательные результаты должны включать заданную неопределенность измерения, если применимо. Количественные результаты не должны основываться на экстраполяции выше максимального калибровочного значения или ниже минимального калибровочного значения.

---

Рекомендации и руководство по применению для стандартного внедрения

Вопросы выбора метода

Специфичность отдельных пищевых аллергенов и методов тестирования может значительно различаться. Поэтому важно убедиться, что выбранный метод обладает необходимой специфичностью. В этом отношении могут быть полезны следующие рекомендации:

Большинство методов ИФА измеряют белки или белковые фракции, специфичные для аллергенного компонента. Однако, как правило, не все аллергенные фракции в комбинации аллергенов могут быть обнаружены с помощью одного теста. Невозможно сделать никаких заявлений о наличии других аллергенных фракций, не охваченных тестом.

Если фрагмент определенного аллергена обнаружен с помощью масс-спектрометрии, это не означает, что могут быть обнаружены другие родственные аллергены. Эти возможности могут быть важны при оценке результатов, полученных в составных пищевых продуктах, содержащих изолированные белковые фракции аллергенных веществ, особенно в случае отрицательных сигналов.

Требования к метрологической прослеживаемости

Основной проблемой при анализе аллергенов является получение результатов измерений, сопоставимых между различными методами измерений и лабораториями. Важнейшей предпосылкой такой сопоставимости является метрологическая прослеживаемость всех результатов измерений к общему стандарту, который служит стандартом для масштабирования данных.

Для установления метрологической прослеживаемости необходимо достичь соглашения об определении измеряемой величины, т. е. величины, подлежащей измерению (JCGM 200 [16]). В целях поддержки текущих оценок риска и законодательства ЕС, количество, используемое для указания содержания аллергенов в пище, должно быть массой (мг) всего аллергенного белкового компонента на кг пищи.

---

Тенденции развития технологий и перспективы стандарта

В связи с быстрым развитием технологии обнаружения пищевых аллергенов стандарт DIN EN 15842 будет продолжать обновляться для адаптации к новым технологиям и методам. Будущие версии могут быть сосредоточены на следующих аспектах:

Интеграция новых технологий обнаружения, таких как спецификации приложений цифровой ПЦР, технологии секвенирования следующего поколения и технологии масс-спектрометрии высокого разрешения; стандартизация методов одновременного обнаружения нескольких аллергенов; расширение и стандартизация библиотек справочных материалов; руководство по стратегиям тестирования на основе оценки риска; и спецификации применения искусственного интеллекта при анализе данных об обнаружении аллергенов.

Разработка этого стандарта будет координироваться с соответствующими правилами Международной организации по стандартизации (ИСО) и Европейского союза для обеспечения сопоставимости и надежности результатов тестирования пищевых аллергенов во всем мире, обеспечивая прочную техническую основу для управления безопасностью пищевых продуктов и защиты потребителей.