ASTM F3088-22
Стандартная практика использования метода центрифугирования для количественной оценки/исследования адгезионных взаимодействий клеток и материала

Стандартный №: ASTM F3088-22
Дата публикации: 2022
Разместил: American Society for Testing and Materials (ASTM)
Последняя версия: ASTM F3088-22

сфера применения

Анализ стандартной технической структуры

Основные элементы	Требования F3088-22	Сравнение с традиционными методами
Применимые типы клеток	Взрослые/прогениторные/стволовые клетки (включая хондроциты, фибробласты и т. д.)	Только специфические адгезивные клетки
Расчет центробежной силы	FD=(ρ_cell-ρ_medium)V_cellRCF	Эмпирическая установка
Чувствительность анализа	213 пН/клетка (пример расчетного значения)	＞500 пН

Ключевые технические моменты реализации

Оптимизация параметров центрифугирования

Стандарт рекомендует использовать пошаговый тест RCF (10-50×g, 100-250×g, 350×g+), наблюдая точку отсоединения 50% клеток с помощью инвертированного микроскопа. Например, исследование первичных суставных хондроцитов быка показало значительную разницу в скорости адгезии клеток P3 при 120 г и 350 г (p<0,05).

Характеристики контроля интерференции

Контроль концентрации клеток: 5×10³-1×10⁴/лунка (96-луночный планшет) для предотвращения осыпания хлопьев
Баланс жидкости: Необходимо сформировать обратный мениск и запечатать его клейкой лентой с уксусной кислотой
Защита от фотообесцвечивания: После окрашивания Hoechst 33342 следует использовать алюминиевую фольгу для защиты от света

Анализ случая применения

В исследовании пассирования хондроцитов стандартный метод успешно количественно оценил изменения прочности адгезии клеток от P0 до P5 (как показано на рисунке 2):

Адгезия увеличилась в 2,8 раза
Сравнение с фибробластами L929 показывает тенденцию к дедифференциации

Предыстория стандартной эволюции

Основываясь на улучшении анализа центрифугирования адгезии Рейеса и Гарсии (2003), впервые опубликованного в 2014 году, версия 2022 года содержит следующие основные обновления:

Добавлено предупреждение о нарушении когезии гидрогелевой матрицы
Уточнено влияние стресса при центрифугировании стопок многолуночных планшетов
Добавлены рекомендации по применению новых флуоресцентных маркеров, таких как кальмодулин

ASTM F3088-22 Ссылочный документ

ASTM F2603 Стандартное руководство по интерпретации изображений полимерных тканевых каркасов
ASTM F2664 Стандартное руководство по оценке прикрепления клеток к поверхности биоматериала физическими методами
ASTM F2739 Стандартное руководство по количественной оценке жизнеспособности клеток и связанных с ней атрибутов в каркасах биоматериалов
ASTM F2944 Стандартная практика автоматического анализа колониеобразующих единиц (КОЕ) — метод получения изображений и анализа для подсчета и характеристики клеток и колоний в культуре
ASTM F2998 Стандартное руководство по использованию флуоресцентной микроскопии для количественного определения площади распространения фиксированных клеток*， 2024-12-01 Обновление
ASTM F3294 Стандартное руководство по выполнению количественных измерений интенсивности флуоресценции в клеточных анализах с помощью широкопольной эпифлуоресцентной микроскопии*， 2024-10-01 Обновление

ASTM F3088-22 История

2022 ASTM F3088-22 Стандартная практика использования метода центрифугирования для количественной оценки/исследования адгезионных взаимодействий клеток и материала
2014 ASTM F3088-14 Стандартный метод испытаний для использования метода центрифугирования для количественной оценки/исследования адгезионных взаимодействий клеток и материала

Стандартная практика использования метода центрифугирования для количественной оценки/исследования адгезионных взаимодействий клеток и материала

Специальные темы по стандартам и нормам

Метод измерения клеток стандартный клеточный метод Количественное определение с использованием метода стандартной стандартной кривой внутреннего стандарта. Цитоцентрифугирование Общие сведения межклеточное взаимодействие межклеточное взаимодействие Цитоцентрифугирование Общие сведения Метод разделения лейкоцитов методы исследования клеток исследовательские ячейки Промышленность проточной цитометрии исследование париетальных клеток

стандарты и спецификации

ASTM F3088-14 Стандартный метод испытаний для использования метода центрифугирования для количественной оценки/исследования адгезионных взаимодействий клеток и материала ASTM F2998-24 Стандартное руководство по использованию флуоресцентной микроскопии для количественного определения площади распространения фиксированных клеток ASTM F2664-07 Стандартное руководство по оценке прикрепления клеток к поверхности биоматериала физическими методами AWWA WQTC55138 Разработка методов обнаружения микроспоридий в модельных и природных водах AWWA WQTC57185 Сравнение культуры клеток in vitro и анализа на мышах для измерения дезинфекции Cryptosporidium parvum ASTM F2664-19e1 Стандартное руководство по оценке прикрепления клеток к поверхности биоматериала физическими методами ASTM F2739-08 Стандартное руководство по количественной оценке жизнеспособности клеток в каркасах биоматериалов AWWA WQTC52888 Обнаружение бацилл в готовой воде ASTM F2664-11 Стандартное руководство по оценке прикрепления клеток к поверхности биоматериала физическими методами

ASTM F3088-22Стандартная практика использования метода центрифугирования для количественной оценки/исследования адгезионных взаимодействий клеток и материала