SN/T 5364.1-2021
Метод выявления патогенных бактерий в пищевых продуктах на экспорт. Часть 1. Vibrio parahaemolyticus. (Англоязычная версия)

Стандартный №

SN/T 5364.1-2021

язык

Китайский, Доступно на английском

Дата публикации

2021

Разместил

Professional Standard - Commodity Inspection

Последняя версия

SN/T 5364.1-2021

сфера применения

Техническое обоснование и значение стандарта

Настоящий стандарт, первый из серии методов обнаружения, выпущенных Главным таможенным управлением в 2021 году, устанавливает систему обнаружения Vibrio parahaemolyticus методом капельной цифровой ПЦР (ddPCR). По сравнению с традиционными методами культивирования, этот метод повышает чувствительность обнаружения до 1-5 КОЕ/25 г (мл) и сокращает время отклика более чем на 50%, что делает его особенно подходящим для тестирования в условиях критической срочности, например, экспортируемой водной продукции.

---

Основной принцип обнаружения

Технические элементы	Традиционная ПЦР	Цифровая капельная ПЦР
Принцип обнаружения	Кумулятивный сигнал флуоресценции	Абсолютный подсчет капель
Чувствительность (КОЕ/25 г)	10-100	1-5
Способность противостоять интерференции	Чувствительность к ингибиторам	Разделение для снижения матричных эффектов

Этот метод основан на том, что генератор капель делит реакционную систему на 20 000 капель. Специфические праймерные зонды разработаны для гена blaCARB (гена, кодирующего β-лактамазу). Количество капель, положительных по флуоресценции FAM, напрямую отражает целевую концентрацию.

---

Ключевые рабочие характеристики

Типичный пример применения

Этот метод использовался для скрининга Vibrio parahaemolyticus в партии замороженных креветок для экспорта в течение 8 часов. 100% положительных образцов были подтверждены как соответствующие стандарту GB4789.7, что сократило сроки на 3 рабочих дня по сравнению с традиционными методами.

Критические контрольные точки:

1. Удаление нуклеазы следует выполнять на этапе выделения нуклеиновой кислоты (обработка при 37 ℃ в течение 15–30 мин)
2. Реакционную систему ddPCR следует готовить строго в соответствии с таблицей 1 с конечной концентрацией праймера 0,75 мкМ
3. Процедура амплификации представляет собой трехэтапный метод: 95 ℃ в течение 10 мин предварительной денатурации → 45 циклов (94 ℃ в течение 30 с, 60 ℃ в течение 1 мин) → 98 ℃ в течение 10 мин

---

Рекомендации по внедрению

1. Требования к валидации оборудования: Новое оборудование должно быть валидировано с использованием стандартного штамма ATCC 17802 со значением CV ≤15% для числа положительных капель
2. Предотвращение и контроль перекрестного загрязнения: Экспериментальные секции должны соответствовать положениям Приложения D GB/T27403-2008, а область генерации капель должна быть физически изолирована от области амплификации
3. Критерии интерпретации результатов: Настройка порогового значения должна гарантировать, что значения флуоресценции пустых контрольных капель будут ниже базовой линии, а положительные образцы должны иметь существенно разделенные скопления капель.

SN/T 5364.1-2021 Ссылочный документ

• GB 4789.7 Тест на пищевую микробиологию Тест на Vibrio parahaemolyticus
• GB/T 27403-2008 Критерий контроля качества лабораторий. Молекулярно-биологическое тестирование пищевых продуктов.
• GB/T 6682  Вода для аналитических лабораторий. Спецификация и методы испытаний.

SN/T 5364.1-2021 История

• 2021 SN/T 5364.1-2021 Метод выявления патогенных бактерий в пищевых продуктах на экспорт. Часть 1. Vibrio parahaemolyticus.

Специальные темы по стандартам и нормам

стандарты и спецификации