BS EN 15634-4:2023
Продовольственные товары. Обнаружение пищевых аллергенов молекулярно-биологическими методами Арахис (Arachis hypogaea). Качественное обнаружение определенной последовательности ДНК в шоколаде с помощью ПЦР в реальном времени (Британский стандарт)

Стандартный №

BS EN 15634-4:2023

Дата публикации

2023

Разместил

British Standards Institution (BSI)

Последняя версия

BS EN 15634-4:2023

сфера применения

Анализ основного содержания стандарта

BS EN 15634-4:2023 определяет метод обнаружения последовательностей ДНК, специфичных для арахиса (Arachis hypogaea), в шоколаде с использованием технологии флуоресцентной ПЦР в реальном времени на основе фрагмента гена Ara h 2 длиной 86 п.н. с пределом обнаружения 5 мг/кг.

Технические элементы	Издание 2016 г. (TS)	Издание 2023 г. (EN)
Тип стандарта	Техническая спецификация	Европейский стандарт
Элементы контроля ПЦР	Раздел реагентов	Раздел стандартных независимых процедур
Новое содержимое	-	Критерии принятия/отклонения (7.4.9)

---

Ключевые технические требования

1. Процесс экстракции ДНК

ДНК из образцов шоколада была выделена с помощью метода CTAB. Основные этапы включают:

• Обработка образца: 2 г образца смешали с буфером CTAB (содержащим 20 г/л CTAB, 1,4 моль/л NaCl)
• Расщепление протеиназой К: инкубировали при 65°C со встряхиванием в течение 90 мин
• Очистка хлороформом/изоамиловым спиртом: после центрифугирования водную фазу собрали, а ДНК осадили изопропанолом
• Очистка твердофазной экстракцией: рекомендуется использовать коммерческий набор

2. Система ПЦР в реальном времени

Реакционная система объемом 25 мкл содержит:

Компоненты	Конечные концентрации	Объем (мкл)
Мастер-смесь для ПЦР	1×	12,5
Праймер AR-58F	0,3 мкМ	0,75
Зонд AR-103T	0,2 мкМ	0,5
ДНК-шаблон	-	5

---

Данные проверки метода

Кольцевой тест с участием 13 лабораторий показал:

• Специфичность: Перекрестной реакции с 17 видами растений нет, включая миндаль и фундук
• Предел обнаружения: Положительный результат обнаружения 85% при 5 мг/кг
• Ложноотрицательный результат: Ложноотрицательный результат 37,5% при 2 мг/кг; Рекомендуемый порог отчетности составляет 5 мг/кг.

Рекомендации по внедрению

Ключевые точки контроля качества

1. Контроль экстракции: Каждая партия экспериментов должна включать положительный контроль экстракции (50 мг/кг арахисового шоколада)
2. Тест на ингибирование ПЦР: Рекомендуется использовать универсальные растительные праймеры или обогащенные контроли
3. Интерпретация данных: Повторите тест, если разница в значении Ct больше 2

Совместимость с инструментами

Стандартная валидация поддерживает множество инструментов для ПЦР в реальном времени, включая: Rotor Gene 6000™, ABI PRISM® 7500 и т. д., но убедитесь, что:

• Флуоресценция Канал обнаружения соответствует маркировке FAM/TAMRA
• Точность контроля температуры ±0,5℃

BS EN 15634-4:2023 Ссылочный документ

• EN 15842 Пищевые продукты. Обнаружение пищевых аллергенов. Общие соображения и валидация методов.

BS EN 15634-4:2023 История

• 2023 BS EN 15634-4:2023 Продовольственные товары. Обнаружение пищевых аллергенов молекулярно-биологическими методами Арахис (Arachis hypogaea). Качественное обнаружение определенной последовательности ДНК в шоколаде с помощью ПЦР в реальном времени (Британский стандарт)

Специальные темы по стандартам и нормам

стандарты и спецификации