GB/T 34801-2017
Определение активности дезоксирибонуклеазы (Англоязычная версия)

Стандартный №

GB/T 34801-2017

язык

Китайский, Доступно на английском

Дата публикации

2017

Разместил

General Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine of the People‘s Republic of China

Последняя версия

GB/T 34801-2017

сфера применения

1. Предпосылки и цель стандарта

GB/T 34801—2017, «Метод анализа активности дезоксирибонуклеазы», был выпущен в 2017 году. Его цель — предоставить стандартизированные рабочие процедуры и методы оценки для определения активности дезоксирибонуклеазы (ДНКазы) в биохимических реагентах. Этот стандарт был разработан Национальным институтом стандартизации Китая (CNIS) и поддержан многочисленными научно-исследовательскими институтами и компаниями.

С развитием биотехнологий, особенно в области генной инженерии, молекулярной биологии и биофармацевтики, спрос на высококачественные ДНКазы продолжает расти. Разработка этого стандарта обеспечивает важную гарантию согласованности и надежности соответствующих продуктов, а также способствует техническому обмену и сотрудничеству как внутри страны, так и за рубежом.

2. Анализ технологической эволюции

Анализы активности ДНКазы прошли путь от качественного к количественному, от эмпирического суждения к стандартизации. Ранние методы в значительной степени опирались на эксперименты in vitro и микроскопические наблюдения, что приводило к субъективным и неточным результатам. С развитием технологий, появлением современных приборов, таких как спектрофотометры, детектирование стало более объективным и количественным. GB/T 34801-2017 использует технологию спектрофотометрии в УФ-видимом диапазоне, выполняющую количественный анализ на основе характерного пика поглощения продукта реакции, катализируемой дезоксирибонуклеазой, при длине волны 260 нм. Этот метод не только повышает эффективность детектирования, но также точность и воспроизводимость результатов.

3. Сравнительная таблица стандартных структур

Стандартные размеры	GB/T 34801—2017	Международный справочный стандарт
Область применения	Биохимические реагенты - Анализ активности дезоксирибонуклеазы	ISO 9308-1: Определение нуклеотидов в пищевых продуктах и кормах для животных
Принцип теста	Спектрофотометрия, изменение поглощения при 260 нм	Колориметрический анализ
Требования к прибору	УФ-видимый спектрофотометр, водяная баня с постоянной температурой, и т. д.	Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)

4. Принцип и процедура анализа

ДНКаза катализирует деградацию ДНК с образованием олигонуклеотидов и мононуклеотидов, продукты которых демонстрируют характерный пик поглощения при 260 нм. Сравнивая изменения поглощения до и после реакции, можно рассчитать единицы активности фермента (U). Конкретные шаги следующие:

1. Подготовьте раствор ДНК тимуса теленка.
2. Подготовьте буфер уксусной кислоты и ацетата натрия и доведите pH до 5,0.
3. Подготовьте пробирки для пустого контроля и пробирки, добавьте соответствующие реагенты и проведите реакцию.
4. Используйте УФ-спектрофотометр для измерения изменения поглощения и расчета активности фермента.

5. Требования к приборам и реагентам

В этом стандарте указаны технические характеристики использования нескольких ключевых приборов и реагентов, включая:

• Термостатическая водяная баня: точность: ±0,1 °C.
• УФ-видимый спектрофотометр: точность поглощения до 0,001.
• pH-метр: точность до 0,01.
• 1 см кварцевая кювета.

Что касается реагентов, то в основном использовались аналитическая степень очистки буферного раствора уксусной кислоты и ацетата натрия, раствор хлорида натрия и высокоочищенная ДНК тимуса теленка.

6. Рекомендации по внедрению

Рекомендации:

• Убедитесь, что экспериментальная среда свободна от загрязнения экзогенными ДНКазами. Рекомендуется проводить эксперимент в чистой комнате.
• Регулярно калибруйте приборы и оборудование, особенно УФ-спектрофотометр и водяную баню с постоянной температурой.
• Строго контролируйте условия реакции (температуру, pH и время), чтобы обеспечить точность результатов теста.

Распространённые проблемы и решения:

• Изменение поглощения неочевидно: возможно, активность фермента слишком низкая или концентрация субстрата слишком высокая. Рекомендуется оптимизировать экспериментальные условия.
• Плохая воспроизводимость результатов: проверьте состояние прибора и точность рабочих этапов.

GB/T 34801-2017 Ссылочный документ

• GB/T 6682  Вода для аналитических лабораторий. Спецификация и методы испытаний.

GB/T 34801-2017 История

• 2017 GB/T 34801-2017 Определение активности дезоксирибонуклеазы

Специальные темы по стандартам и нормам

стандарты и спецификации