SN/T 4793-2017
Метод флуоресцентной ПЦР в реальном времени для обнаружения плазмодий в пограничных портах (Англоязычная версия)
- Стандартный №
- SN/T 4793-2017
- язык
- Китайский, Доступно на английском
- Дата публикации
- 2017
- Разместил
- Professional Standard - Commodity Inspection
- Последняя версия
- SN/T 4793-2017
- сфера применения
-
Анализ основного содержания стандарта
Настоящий стандарт устанавливает полную систему молекулярного обнаружения плазмодиев с использованием такого оборудования, как прибор для флуоресцентной количественной ПЦР, для проведения дифференциальной диагностики четырех типов человеческих плазмодиев с помощью специфических комбинаций праймеров и зондов. Технические моменты включают:
Тип анализа Целевой ген Тип зонда Температура плавления (℃) Универсальный анализ Консервативная последовательность FAM-MGB - Plasmodium falciparum Специфический фрагмент FAM-BHQ1 - Plasmodium ovale Вид-специфичный Последовательность SYBR Green 72.5
Основные технические параметры
Требования к образцу: 3-5 мл венозной крови следует собрать в пробирки с антикоагулянтом ЭДТА и хранить при -20°C, чтобы избежать повторного замораживания и размораживания.
Система амплификации: 25 мкл стандартного объема реакции, содержащего 12,5 мкл 2× MasterMix и специфические праймеры и зонды.
Параметры циклирования: Начальная денатурация при 95°C в течение 5 мин, затем 40 циклов (95°C в течение 10 с → 58°C в течение 45 с).
Точки реализации
1. Биологическая безопасность: Экспериментальные операции должны выполняться в боксе биологической безопасности класса IIA в соответствии с требованиями GB19489.
2. Требования к контролю качества: Необходимо установить отрицательные и положительные контроли, а значение Ct положительного контроля должно быть <35
3. Интерпретация результатов:
- Положительный результат: Ct ≤ 35 и типичная кривая амплификации
- Подозрительный результат: 35
- Отрицательный результат: кривая амплификации отсутствует
Применение стандарта
Настоящий стандарт впервые устанавливает стандартизированный процесс молекулярного обнаружения малярии в портах въезда. По сравнению с традиционными методами микроскопии:
- Чувствительность увеличивается в 100 раз (можно обнаружить 0,1 паразита/мкл крови)
- Время обнаружения сокращается до 4 часов
- Достигается точное типирование четырёх видов плазмодиев
SN/T 4793-2017 Ссылочный документ
- GB 19489 Лаборатории. Общие требования биобезопасности.
SN/T 4793-2017 История
- 2017 SN/T 4793-2017 Метод флуоресцентной ПЦР в реальном времени для обнаружения плазмодий в пограничных портах
