GB/T 41212-2021
Нанотехнологии - анализ 5-(и 6)-хлорметил-2',7'-дихлор-дигидрофлуоресцеиндиацетата (CM-H2DCF-DA) для оценки индуцированного наночастицами внутриклеточного производства активных форм кислорода (АФК) в линии макрофагов RAW 264.7. (Англоязычная версия)
- Стандартный №
- GB/T 41212-2021
- язык
- Китайский, Доступно на английском
- Дата публикации
- 2021
- Разместил
- General Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine of the People‘s Republic of China
- Последняя версия
- GB/T 41212-2021
- сфера применения
-
Техническое обоснование и значение стандарта
В связи с быстрым развитием нанотехнологий потенциальные проблемы биологической безопасности наноматериалов привлекают всё большее внимание. Исследование Международного альянса по наноэкологии, здоровью и безопасности (IANH) показывает, что около 37% исследований нанотоксикологии страдают от межлабораторной невоспроизводимости результатов. Настоящий стандарт устанавливает воспроизводимые характеристики для обнаружения активных форм кислорода (ROS) в наночастицах на основе метода флуоресценции CM-H2DCF-DA, заполняя методологический пробел в этой области как на национальном, так и на международном уровне.
Анализ основного метода
Ключевые этапы Технические моменты Индикаторы контроля качества Культура клеток RAW264.7 Пассаж ≤30 раз, выживаемость >95% Время удвоения 18-24 ч за 48 ч Дисперсия наночастиц Стабилизация сывороточной среды Отклонение размера частиц при обнаружении DLS <15% Окрашивание CM-H2DCF-DA Защитить от света, инкубировать в течение 30 мин Концентрация ДМСО <0,1%
Стратегия устранения помех
Обратите особое внимание на три типа помех в эксперименте:
- Ложноположительная интерференция: Автофлуоресценцию наночастиц (например, квантовых точек) необходимо устранить с помощью холостого контроля
- Ложноотрицательная интерференция: Сыворотка вызывает инактивацию зонда и требует строгой промывки PBS
- Ограничения метода: Низкая чувствительность для обнаружения супероксид-аниона, рекомендуется комбинировать с методом ЭПР для проверки
Стандарт рекомендует использовать 60 нм катионные полистирольные частицы в качестве положительного контроль. Эффективность индукции ROS положительно коррелирует с его концентрацией (r²>0,95).
Сравнение технологической эволюции
Метод обнаружения Чувствительность Специфичность Производительность Метод CM-H2DCF-DA 10 нМ H₂O₂ Средняя Высокая (96-луночный планшет) Спектроскопия ЭПР 1 нМ ·OH Высокая Низкая Люциферазный репортер Анализ 5 нМ O₂⁻ Высокая Средняя
Рекомендации по внедрению
1. Предварительная фаза: Необходимо выполнить валидацию взаимодействия наночастиц с CM-H2DCF-DA (Стандартный пункт 8.8)
2. Нормализация данных: Рекомендуется использовать стандарты флуоресценции MESF для калибровки проточного цитометра
3. Проверка результатов: Положительные результаты должны быть подтверждены контрольным экспериментом Sin1 (Стандартное приложение D)
4. Расширенное применение: Кривые пролиферации и характеристики ответа ROS должны быть проверены перед использованием в других линиях клеток
GB/T 41212-2021 Ссылочный документ
- ISO 10993-5 Биологическая оценка медицинских изделий. Часть 5. Испытания на цитотоксичность: методы in vitro
GB/T 41212-2021 История
- 2021 GB/T 41212-2021 Нанотехнологии - анализ 5-(и 6)-хлорметил-2',7'-дихлор-дигидрофлуоресцеиндиацетата (CM-H2DCF-DA) для оценки индуцированного наночастицами внутриклеточного производства активных форм кислорода (АФК) в линии макрофагов RAW 264.7.
