SN/T 5126-2019
Качественный ПЦР-метод обнаружения генетически модифицированных компонентов в лососе и продуктах его переработки (Англоязычная версия)

Стандартный №

SN/T 5126-2019

язык

Китайский, Доступно на английском

Дата публикации

2019

Разместил

Professional Standard - Commodity Inspection

Последняя версия

SN/T 5126-2019

сфера применения

Техническое обоснование стандарта

Настоящий стандарт устанавливает метод ПЦР-детекции гена GH (гормона роста) и гена AFP (антифризного белка), уникальных для генетически модифицированных лососевых продуктов. Он был выпущен и введён в действие в 2019 году и применяется к импортно-экспортному контролю и карантину.

---

Принцип обнаружения ядра

Цель обнаружения	Последовательность праймера	Длина амплификации	Определение значения Ct
Ген GH	Вышестоящий: 5'-CATCTC... Нижестоящий: 5'-CGTGGC...	234 п.н.	≤30 положительных
Ген AFP	Вышестоящий: 5'-CACAGG... Нижестоящий: 5'-CAGGTT...	187 п.н.	≤35 Подозрительно

---

Основные рабочие характеристики

Требования к выделению ДНК

Извлеките ДНК-матрицу с помощью метода фенол-хлороформа (соотношение 24:1) до концентрации 50-100 нг/мкл и храните при температуре -80 °C до использования.

Система реакции ПЦР

Система объемом 20 мкл включает:
- 10 мкл 2× премикса
- 0,6 мкл каждого из восходящих и нисходящих праймеров (10 пмоль/мкл)
- 0,6 мкл зонда
- 1 мкл ДНК-матрицы

Амплификация Процедура

Предварительная денатурация при 95°C в течение 3 мин; 40 циклов 95°C в течение 10 с → 60°C в течение 30 с; обнаружение с использованием зонда с двойной меткой FAM/HEX.

---

Критерии оценки результата

Тип теста	Положительная оценка	Отрицательная оценка
Скрининговый тест	Ct≤30 и типичная кривая амплификации	Ct≥40 или отсутствие амплификации
Проверочный тест	Двойной ген Ct≤35	Любой ген Ct≥35

---

Предложения по внедрению

Точки контроля качества

1. Для каждой партии экспериментов требуется положительный контроль (ДНК лосося AAAS) и отрицательный контроль
2. Реакционную систему необходимо готовить на льду
3. Избегайте аэрозольного загрязнения

Технологическая эволюция

По сравнению с GB/T 19495.3-2004, этот стандарт:
- Добавлено одновременное обнаружение двух генов
- Используется технология флуоресцентной количественной ПЦР
- Оптимизированные методы извлечения нуклеиновых кислот

SN/T 5126-2019 Ссылочный документ

• GB/T 1.1-2009 Директивы по стандартизации. Часть 1: Структура и разработка стандартов.
• GB/T 19495.3-2004  Обнаружение генетически модифицированных организмов и продуктов их переработки. Экстракция нуклеиновой кислоты
• GB/T 27403-2008 Критерий контроля качества лабораторий. Молекулярно-биологическое тестирование пищевых продуктов.

SN/T 5126-2019 История

• 2019 SN/T 5126-2019 Качественный ПЦР-метод обнаружения генетически модифицированных компонентов в лососе и продуктах его переработки

стандарты и спецификации