GB/T 38485-2021
Определение следовых остатков генов микроорганизмов — цифровая микрокапельная ПЦР. (Англоязычная версия)
- Стандартный №
- GB/T 38485-2021
- язык
- Китайский, Доступно на английском
- Дата публикации
- 2021
- Разместил
- General Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine of the People‘s Republic of China
- Последняя версия
- GB/T 38485-2021
- сфера применения
-
Анализ основного содержания стандарта
Настоящий стандарт определяет методологическую систему для обнаружения следовых остатков генов микроорганизмов в концентрациях ниже 100 пг/мл с использованием цифрового прибора для капельной ПЦР, уделяя особое внимание созданию стандартизированного процесса обнаружения характерных генов Saccharomyces cerevisiae ATCC204508 и Lactobacillus plantarum CGMCC1.2437 в обработанных продуктах.
Инновации в технических принципах
Технические размеры Традиционная ПЦР Цифровая капельная ПЦР Принцип детекции Относительное количественное определение Абсолютное количественное определение Чувствительность уровень нг уровень пг (ниже 100 пг/мл) Метод разделения Система макрореакций Микролитр Капли масла в воде
Основные рабочие характеристики
Требования к экстракции нуклеиновых кислот
Элюцию ДНК необходимо проводить с использованием воды GB/T6682 Grade 1, стерилизованной при 121 °C. Конечный объем элюции должен строго контролироваться на уровне 50 мкл, чтобы гарантировать соответствие чувствительности обнаружения требованиям к концентрации шаблона 12,5 нг/мкл.
Конфигурация реакционной системы
Стандарт определяет специфические комбинации праймеров и зондов для двух микроорганизмов:
- Saccharomyces cerevisiae: зонды SC-F/SC-R/SC-P (меченые FAM)
- Lactobacillus plantarum: зонды pF/pR/pP (меченые FAM)
Конечная концентрация реакционной системы должна строго соответствовать спецификациям конфигурации 20 мкл общего объема, приведенным в таблицах 1 и 2.
Анализ ключевых моментов контроля качества
Согласно стандарту, установлена трехуровневая система контроля качества:
1) Отрицательный контроль: использование ДНК из нецелевого штамма для проверки специфичности
2) Положительный контроль: использование метода градиентного разбавления (1×103 КОЕ/мл) для проверки чувствительности
3) Бланк-контроль: используйте стерильную воду для контроля перекрестного загрязнения
Рекомендации по внедрению
1. Лаборатория должна быть оборудована термоциклером со скоростью нагрева и охлаждения ≥ 2,5 ℃/с
2. Амплификацию следует завершить в течение 4 часов после образования капель
3. Рекомендуется регулярно проверять точность длины волны 600 нм УФ-видимого спектрофотометра
4. Для проверки совместимости системы с помощью предварительных экспериментов необходимо использовать наборы разных марок
GB/T 38485-2021 Ссылочный документ
- GB/T 6682 Вода для аналитических лабораторий. Спецификация и методы испытаний.
GB/T 38485-2021 История
- 2021 GB/T 38485-2021 Определение следовых остатков генов микроорганизмов — цифровая микрокапельная ПЦР.
