DB15/T 3451-2024
Технический регламент по выделению и идентификации Pseudomonas в ризосферной почве Cyperus oleifera (Англоязычная версия)
- Стандартный №
- DB15/T 3451-2024
- язык
- Китайский, Доступно на английском
- Дата публикации
- 2024
- Разместил
- Inner Mongolia Provincial Standard of the People's Republic of China
- Последняя версия
- DB15/T 3451-2024
- сфера применения
-
Интерпретация основного содержания технического регламента
Настоящий стандарт впервые систематически стандартизирует весь процесс выделения и идентификации Pseudomonas aeruginosa rhizosphericus из Cyperus oleifera. Его техническая структура включает пять основных звеньев: отбор проб → приготовление питательной среды → очистка штамма → молекулярная идентификация → оценка результата. Основные технические показатели следующие:
Технические ссылки Ключевые параметры Инновационные баллы Сбор ризосферной почвы Пятиточечный метод отбора проб, 1 мм прикрепленной почвы Стандарт отбора проб корневой системы Cyperus oleifera выяснен впервые Питательная среда TSA Пенициллин + Налидиксовая кислота + Натамицин Тройная система отбора антибиотиков Молекулярная идентификация rpoD + gyrB Double Генный анализ 97% порог гомологии
Анализ ключевых моментов для стандартной реализации
1. Технические характеристики отбора проб
Был использован пятиэтапный асептический метод: ① Предварительное охлаждение контейнера для отбора проб с помощью пакетов со льдом. ② Очистка поверхности земли. ③ Выкопать мелкую корневую зону. ④ Контроль размера образца до 10 г. ⑤ Быстро заморозить и хранить при температуре -80 °C. Поддержание низкой температуры 4 °C во время транспортировки особенно важно для предотвращения изменений в микробном сообществе.
2. Инновация в области культуральных сред
Три основные характеристики культуральной среды TSA:
1) Бромид цетилтриметиламмония ингибирует грамположительные бактерии
2) Глицерин служит источником углерода
3) Комбинация антибиотиков (0,06 г/л пенициллина + 15 мг/л налидиксовой кислоты + 10 мг/л натамицина) обеспечивает специфическую селекцию
Подробное объяснение технологии молекулярной идентификации
Пример: идентификация Pseudomonas на уровне видов
Возьмем в качестве примера Pseudomonas putida:
1) Амплификация гена rpoD: четкая полоса длиной 750 п.н. была получено при температуре отжига 62 °C
2) Филогенетическое дерево гена gyrB показывает, что он кластеризован на той же ветви, что и стандартный штамм ATCC 17483
3) Если согласованность двойного гена составляет ≥97%, то определяется, что это один и тот же вид.Рекомендации по применению стандартов
- Рекомендуется использовать GPS-позиционирование для записи географической информации во время отбора проб
- В системе реакции ПЦР следует установить отрицательный контроль
- Для филогенетического анализа рекомендуется использовать программное обеспечение MEGA7.0
DB15/T 3451-2024 Ссылочный документ
- GB 8538 Методы проверки национальных стандартов безопасности пищевых продуктов для питьевой природной минеральной воды
- GB/T 6682 Вода для аналитических лабораторий. Спецификация и методы испытаний.
- SN/T 4624.17 Методы тестирования микробных агентов для защиты окружающей среды при въезде. Часть 17: Pseudomonas putida
DB15/T 3451-2024 История
- 2024 DB15/T 3451-2024 Технический регламент по выделению и идентификации Pseudomonas в ризосферной почве Cyperus oleifera
