11 Испытание на антибактериальный эффект 11.1 Инокуляция образцов: Возьмите каждые 2 образца или 2 контрольных образца как группу. Возьмите 2 группы контрольных образцов и 1 группу образцов соответственно и поместите их в 3 пустые стерильные чашки Петри. Добавьте 0,25 мл суспензии тестируемых бактерий. (9), при этом суспензия тест-бактерий должна как можно более равномерно распределиться по тестируемому образцу и контрольному образцу. Две группы контрольных образцов использовали для элюции и тестирования сразу после инокуляции, и одну для элюирования и тестирования после культивирования в течение периода времени (t часов); одну группу образцов использовали для элюирования и тестирования после культивирования в течение определенного периода времени. (т часов). Время культивирования бактерий t должно быть не менее 18 ч. При этом количество колоний, выделенных из контрольной пробы, элюированных сразу после инокуляции, должно находиться в пределах от (1×104) КОЕ/групповое распределение до (9× 104) Распределение КОЕ/группы. 11.2 Немедленно элюируйте. Возьмите стерильным пинцетом группу контрольных образцов, которые только что были инокулированы бактериями, поместите их в пакет для гомогенизации, содержащий 10 мл бактериального элюента (7.8), и взбивайте их в гомогенизаторе в течение 1 минуты для удаления. Бактерии из образца элюировались с носителя. Если нет перемешивающего гомогенизатора, контрольный образец можно перенести в стерильную колбу Эрленмейера емкостью 100 мл, содержащую 10 мл бактериального элюента (7.8), и встряхивать вручную в течение 30 с (ширина качания около 30 см), чтобы элюировать бактерии с носителя. Лаборатория может отрегулировать дозировку бактериального элюента (7.8) до 20 мл в соответствии с реальными условиями. 11.3 Продолжайте культивирование и элюирование инокулированного образца. Накройте две стерильные чашки Петри (одну с 2 образцами, другую с 2 контрольными образцами) инокулированным носителем тестируемой бактериальной суспензии. Мембрану герметизируют, чтобы предотвратить испарение жидкости на носителе. . Культивируют в инкубаторе с постоянной температурой и влажностью (6.1) при подходящей температуре в течение t часов. В этот период относительную влажность инкубатора следует контролировать выше 85%, а температуру культуры определять по засеянным бактериям. После завершения культивирования поместите тестируемый образец и контрольный образец в пакет для гомогенизации, содержащий 10 мл бактериального элюирующего раствора, и взбивайте его в бьющемся гомогенизаторе в течение 1 минуты, чтобы элюировать бактерии с носителя. Если нет перемешивающего гомогенизатора, испытуемый образец и контрольный образец можно перенести в стерильную треугольную колбу емкостью 100 мл, содержащую 10 мл бактериального элюента (7.8), и встряхивать вручную в течение 30 с (ширина качания около 30 см), чтобы удалить бактерии из перевозчика. Смойте его. Лаборатория может отрегулировать дозировку бактериального элюента (7.8) до 20 мл в соответствии с реальными условиями. 11.4 Определение количества жизнеспособных бактерий в пробе. С помощью пипетки перенесите 1 мл элюента (11.2 или 11.3) в пробирку, содержащую 9 мл PBS (7.5), и тщательно встряхните. Возьмите 1 мл раствора образца из пробирки и перелейте его в другую пробирку, содержащую 9 мл PBS (7,5), и тщательно встряхните (или сделайте 2–3 разведения после соответствующего разведения). По аналогии были сделаны 10-кратные серийные разведения элюентов 11,2 и 11,3 соответственно. Заменяйте наконечник каждый раз, когда пипетируете. С помощью пипетки возьмите по 1 мл раствора образца из каждой пробирки серийного разведения и вылейте его в плоскую чашку, затем налейте 15–20 мл культуральной среды TSA (7.3) при температуре около 45°C, закройте крышкой, поверните плоскую чашку, чтобы тщательно перемешать, и поставьте ее при комнатной температуре, оставьте до затвердевания, переверните чашку, инкубируйте в биохимическом инкубаторе (6.2) в течение 48 часов и подсчитайте количество колоний. Температуру культуры определяют в зависимости от инокулированных бактерий. Если на планшете, инокулированном раствором образца с низким разведением, рост колоний отсутствует, но рост колоний наблюдается на планшете, инокулированном раствором образца с высоким разведением, считайте, что рост колоний отсутствует. Если градиента числа колоний между чашками с разными разведениями нет, подсчитывают количество колоний на чашках с меньшим разведением. 11.5 Параллельное испытание Повторите операцию 3 раза в соответствии с экспериментальными этапами, указанными в 11.1~11.4. 12 Расчет и оценка результатов 12.1 Оценка эффективности эксперимента Величину бактериального роста F рассчитывают по формуле (1) Когда F больше или равно 1,5, текущий тест считают действительным. F = lgCt-lgC0 Число бактерий; C0 - количество бактерий, измеренное сразу после инокуляции контрольного образца. 12.2 Расчет бактериостатического уровня Бактериостатический уровень X рассчитывают по формуле (2). …………(2) Ct——Количество бактерий, измеренное после инокуляции контрольного образца и культивирования в течение t часов; Tt——Образец инокулирован и культивировали в течение t часов. Измеряли количество бактерий. Берется среднее значение трех тестов, а результат сохраняется с точностью до одного десятичного знака. 12.3 Выражение результатов В качестве результата используют расчетное значение бактериостатического показателя. Когда расчетное значение бактериостатического уровня отрицательное, оно выражается как «0,0%», а когда расчетное значение бактериостатического уровня составляет >99,9%, оно выражается как «>99,9%». 12.4 Оценка долговременного антибактериального эффекта. Если уровень антибактериальности составляет ≥ 90%, образец имеет долговременный антибактериальный эффект в течение t часов. Когда уровень бактериостатичности ≥ 99%, образец имеет хороший долгосрочный бактериостатический эффект в течение t часа.
T/ZGXX 0004-2022 История
2022T/ZGXX 0004-2022 Метод оценки долговременного антибактериального эффекта ежедневных химических продуктов