T/YNANT 08-2024 Метод мультиплексной флуоресцентной количественной RT-PCR в реальном времени для обнаружения подтипов H5, H7 и H9 вируса птичьего гриппа (Англоязычная версия)
На основе специфической последовательности общего гена вируса птичьего гриппа были синтезированы пара специфических праймеров и специфический флуоресцентный двумеченный зонд. 5'-конец и 3'-конец зонда помечены разными флуорофорами соответственно. Например, 5'-конец помечен флуоресцеином FAM. Испускаемая им флуоресценция может быть принята детекторным прибором и называется репортерным флуорофором (изображен). 3'-конец обычно помечен флуоресцеином TAMRA, который может поглощать сигнал флуоресценции, излучаемый 5'-концевым репортерным флуорофором на близком расстоянии, который называется гасящим флуорофором (обозначается Q). Когда реакция ПЦР находится на стадии отжига, пара праймеров и зонд одновременно объединяются с фрагментом целевого гена. В это время сигнал флуоресценции, излучаемый группой R на зонде, поглощается группой Q. , и прибор не может обнаружить флуоресценцию, излучаемую сигналом Р., когда реакция ПЦР переходит на стадию удлинения, фермент Taq, руководствуясь праймерами, использует четыре нуклеотида в качестве субстратов и синтезирует новую цепь вдоль матричной цепи в соответствии с принцип спаривания оснований; когда расширение цепи продолжается. При зондировании места связывания оно тормозится и не может продолжаться. В это время фермент Taq гидролизует зонд на отдельные нуклеотиды, чтобы устранить препятствие. Группа R, помеченная на зонде, освобождается и обнаруживается детектором под действием фермента Taq, процесс удлинения продолжает синтезировать полную новую цепь. Обе группы R и Q свободны в растворе, и прибор. может продолжать обнаруживать сигнал флуоресценции, излучаемый R.
T/YNANT 08-2024 История
2024T/YNANT 08-2024 Метод мультиплексной флуоресцентной количественной RT-PCR в реальном времени для обнаружения подтипов H5, H7 и H9 вируса птичьего гриппа