5.1 Сырье и вспомогательные материалы 5.1.1 должны соответствовать требованиям T/CSCB0001. 5.1.2 Стандарты оценки и скрининга доноров, методы сбора, стандарты транспортировки и стандарты передачи донорских клеток должны быть установлены для обеспечения безопасности доноров и клеток. 5.1.3 Доноры должны быть проверены на ВИЧ, ВГВ, ВГС, HTLV, ВЭБ, ЦМВЦ и ТП, а результаты зафиксированы. 5.2 Методы выделения и культивирования 5.2.1 Выделение и экстракция: Разрезают ткань амниотической мембраны человека на фарш и выделяют мезенхимальные стволовые клетки амниотической мембраны человека путем расщепления коллагеназой. Первичная культура мезенхимальных стволовых клеток амниотической мембраны человека. 5.2.2 Смена среды с амниотическими мезенхимальными стволовыми клетками человека.Среду меняют в зависимости от роста клеток. 5.2.3 Перенос амниотических мезенхимальных стволовых клеток человека должен осуществляться с соответствующей плотностью, своевременно и быстро. 5.2.4 Криоконсервация амниотических мезенхимальных стволовых клеток человека Криоконсервированные клетки запрограммированы на охлаждение и последующее хранение в жидком азоте. 5.2.5 Получение амниотических мезенхимальных стволовых клеток человека Выньте пробирку для криоконсервации, быстро разморозьте ее, центрифугируйте и промойте перед культивированием. 5.2.6 Приготовление препарата мезенхимальных стволовых клеток амниотической мембраны человека. Раствор мезенхимальных стволовых клеток амниотической мембраны человека находится в гомогенном состоянии, без хлопьевидного осаждения, а выживаемость клеток составляет ≥90%. 5.3 Критические показатели качества 5.3.1 Морфология клеток При адгезивном культивировании клетки представляют собой веретенообразную и веретенообразную форму фибробластов с однородной морфологией. 5.3.2 Хромосомный кариотип Нормальный кариотип должен быть 46,XX или 46,XY. 5.3.3 Выживаемость клеток: Выживаемость некриоконсервированных клеток составляет ≥90%, а выживаемость клеток после криоконсервации и восстановления составляет ≥70%. 5.3.4 Уровень положительных результатов по белкам-маркерам клеток CD105, CD73 и CD90 составляет ≥95%, уровень положительных результатов по CD11b, CD19, CD31, CD34, CD45 и HLA-DR составляет ≤2%. 5.3.5 Иммунорегуляция: Индоламин-2,3-диоксигеназа (IDO) экспрессируется после индукции воспалительными факторами (IFN-γ или IFN-γ в сочетании с TNF-α). Совместное культивирование с Т-лимфоцитами может ингибировать пролиферацию Т-лимфоцитов и секрецию IFN-γ и TNF-α. 5.3.6 Трехлинейная дифференцировка обладает дифференцировочным потенциалом остеогенеза, адипогенеза и хондрогенеза. 5.3.7 Результаты теста на образование опухолей in vivo у животных с опухолеобразующим иммунодефицитом (например, мышей) отрицательны. 5.3.8. Микроорганизмы, такие как грибы, бактерии, микоплазма, ВИЧ, HBV, HCV, HTLV, EBV, HCMV и TP, являются отрицательными. 5.4 Управление процессом 5.4.1 Управление процессом, такое как амплификация, криоконсервация и восстановление, должно соответствовать требованиям T/CSCB0001. 5.4.2 Результаты теста STR клеток должны соответствовать результатам донорских клеток. 6 Методы исследования 6.1 Морфологию клеток наблюдают в условиях двумерного культивирования с помощью клеточного микроскопа светлого поля. 6.2 Кариотип определяют в соответствии с «Методикой приготовления и испытания субстратов клеток животных для производства и испытаний биологических препаратов» «Фармакопеи Китайской Народной Республики». 6.3 Жизнеспособность клеток проверяют по методу Приложения А. 6.4 Маркеры клеточной поверхности тестируют по методу, приведенному в Приложении Б. 6.5 Иммуномодуляция 6.5.1 Индукцию экспрессии IDO тестировали в соответствии с методом, приведенным в Приложении C. 6.5.2 Ингибирование пролиферации Т-лимфоцитов проверяют по методу, приведенному в Приложении D. 6.5.3 Подавить секрецию IFN-γ и TNF-α Т-лимфоцитами.Испытание проводят по методике Приложения Д. 6.6 Трехлинейная дифференциация 6.6.1 Остеогенную дифференцировку проверяют по методу, приведенному в Приложении F. 6.6.2 Адипогенную дифференцировку проверяют по методике приложения Ж. 6.6.3 Хондрогенную дифференцировку проверяют по методике приложения З. 6.7 Туморогенность проверяют по методике Приложения I. 6.8 Микроорганизмы 6.8.1 Грибы проверяют в соответствии с пунктом «1101 Метод испытания на стерильность» «Фармакопеи Китайской Народной Республики». 6.8.2 Бактерии испытывают в соответствии с «Методом испытания на стерильность 1101» «Фармакопеи Китайской Народной Республики». 6.8.3 Микоплазму выявляют в соответствии с «Методом испытания на стерильность 3301» «Фармакопеи Китайской Народной Республики». 6.8.4 ВГВ тестируется в соответствии с методом определения нуклеиновых кислот, указанным в «Национальных операционных процедурах клинического тестирования». 6.8.5HCV тестируется по методу нуклеиновых кислот WS213. 6.8.6 ВИЧ тестируется по методу нуклеиновых кислот WS293. 6.8.7HTLV тестируется методом нуклеиновых кислот в соответствии с «Национальными процедурами проведения клинических испытаний». 6.8.8 ВЭБ тестируется методом нуклеиновых кислот в соответствии с «Национальными процедурами проведения клинических испытаний». 6.8.9 ЦМВИ тестируется методом нуклеиновых кислот в соответствии с «Национальными процедурами проведения клинических испытаний». 6.8.10TP тестируется по методу нуклеиновых кислот WS273. 7 правил проверки
T/LNSI 001-2023 История
2023T/LNSI 001-2023 Амниотические мезенхимальные стволовые клетки человека