GB/T 34777-2017
Обнаружение остаточной ДНК в биологическом продукте, который экспрессируется из клеток яичника китайского хомячка (CHO) — флуоресцентный количественный анализ полимеразной цепной реакции. (Англоязычная версия)

Стандартный №

GB/T 34777-2017

язык

Китайский, Доступно на английском

Дата публикации

2017

Разместил

General Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine of the People‘s Republic of China

Последняя версия

GB/T 34777-2017

сфера применения

Анализ основного содержания стандарта

Настоящий стандарт устанавливает технические спецификации на основе флуоресцентной количественной ПЦР SYBR для обнаружения остаточной ДНК клетки-хозяина, ключевого показателя контроля качества в биофармацевтической промышленности. Основное содержание включает:

Технические элементы	Стандартные требования	Значение для отрасли
Цель обнаружения	Ген 16SrRNA клетки CHO	Высокое число копий гена обеспечивает чувствительность обнаружения
Дизайн праймера	Прямой: 5'-CCAGGCATTGGTGGCAC-3' Обратный: 5'-AGACAGGGTTTCTCTGT-3'	Специфическая амплификация обеспечивает точность
Диапазон количественного определения	100нг/мл–0,1пг/мл	Линейный диапазон, охватывающий 6 порядков величины

---

Ключевые требования к приборам и реагентам

Стандарт четко оговаривает, что флуоресцентный количественный ПЦР-прибор, необходимый для тестирования, должен поддерживать канал флуоресценции SYBR, и в то же время выдвигает точные требования к вспомогательному оборудованию:

Типичная схема конфигурации

• Микроцентрифуга: скорость должна достигать 23 000 об/мин
• Электрическая водяная баня с постоянной температурой: точность контроля температуры ±0,5 ℃
• Набор для извлечения ДНК должен включать этап обработки протеиназой К

---

Ключевые моменты технической реализации

Система контроля качества

Стандарт устанавливает строгие показатели контроля качества:

1. Требование к эффективности амплификации составляет 90%-110%
2. Коэффициент корреляции стандартной кривой R²≥0,99
3. Извлечение образцов с добавлением белка должно контролироваться в пределах от 50% до 150%

Формула расчета

Остаточное содержание ДНК рассчитывается следующим образом:
x = (A×f)/ρ
Где x — остаточное количество (пг/мг), A — концентрация пробы (пг/мл), f — коэффициент разбавления, а ρ — концентрация белка (мг/мл)

---

Рекомендации по стандартному применению

Особое внимание следует уделять во время внедрения:

• Концентрация белка должна контролироваться в пределах от 1 до 20 мг/мл во время предварительной обработки образцов
• Каждая партия тестирования должна включать положительные и отрицательные контроли
• Повторное тестирование требуется, если SD значения Ct между повторными лунками превышает 0,5

GB/T 34777-2017 Ссылочный документ

• GB/T 6682  Вода для аналитических лабораторий. Спецификация и методы испытаний.

GB/T 34777-2017 История

• 2017 GB/T 34777-2017 Обнаружение остаточной ДНК в биологическом продукте, который экспрессируется из клеток яичника китайского хомячка (CHO) — флуоресцентный количественный анализ полимеразной цепной реакции.

Специальные темы по стандартам и нормам

стандарты и спецификации