DIN EN 15791:2009-12
Корма для животных. Определение дезоксиниваленола в кормах для животных. Высокоэффективный жидкостный хроматографический метод с УФ-детектированием и иммуноаффинной очисткой колонки; Немецкая версия EN 15791:2009.

Стандартный №

DIN EN 15791:2009-12

Дата публикации

2009

Разместил

German Institute for Standardization

Последняя версия

DIN EN 15791:2009-12

сфера применения

DIN EN 15791:2009 Технический анализ

DIN EN 15791:2009 — это авторитетная техническая спецификация для обнаружения дезоксиниваленола в кормах, опубликованная Европейским комитетом по стандартизации. В этом стандарте используется высокоэффективная жидкостная хроматография с ультрафиолетовым детектированием в сочетании с очисткой на иммуноаффинной колонке, что обеспечивает точный и надежный метод обнаружения для мониторинга безопасности кормов.

Область применения и технические принципы

Настоящий стандарт применяется к обнаружению ДОН в диапазоне концентраций от 150 мкг/кг до 4000 мкг/кг. Технический принцип основан на водной экстракции, специфической очистке на иммуноаффинной колонке и количественном анализе с использованием высокоэффективного жидкостного хроматографа.

Параметры детекции	Технические требования	Индикаторы контроля качества
Диапазон детекции	150-4000 мкг/кг	Коэффициент линейной корреляции>0,99
Иммуноаффинная колонка	Связывающая способность ≥2500 нг	Процент восстановления ≥70%
Условия хроматографирования	УФ-детекция при 220 нм	Время удерживания отклонение<2%
Требования к точности	Предел повторяемости r	Предел воспроизводимости R

---

Основные реагенты и конфигурация прибора

Стандарт строго регламентирует требования к чистоте реагентов и рабочим характеристикам прибора. Органические растворители, такие как ацетонитрил, метанол и ледяная уксусная кислота, должны быть класса чистоты для ВЭЖХ. Все опасные операции с реагентами должны проводиться в вытяжном шкафу с использованием полного комплекта средств индивидуальной защиты.

Система приготовления стандартных растворов

Концентрация стандартного исходного раствора DON составляет 250 мкг/мл, точно откалибрована с помощью УФ-спектрофотометрии, рассчитана и проверена с использованием молярного коэффициента поглощения 681±12,6 м²/моль для обеспечения точности стандартной кривой.

Основные требования к приборам

Система ВЭЖХ должна быть оснащена бинарным градиентным насосом, подходящей аналитической колонкой (например, Phenomenex ODS3-Prodigy), УФ-детектором и автодозатором. Аналитическая колонка должна эффективно отделять дезоксиниваленол (DON) от мешающих компонентов.

---

Процедура подготовки и очистки образца

Предварительная обработка образца выполняется по стандартизированной схеме: 25 г образца помещают в 200 мл воды на 1 час. На ключевом этапе очистки используется иммуноаффинная колонка для специфической адсорбции дезоксиниваленола (DON) и эффективного удаления мешающих компонентов матрицы.

Этапы работы	Технические параметры	Точки контроля качества
Извлечение образца	25 г образца + 200 мл воды, встряхивать в течение 1 ч	Полностью растворить и тщательно перемешать
Очистка фильтрацией	2 мл раствора экстракта загружают в колонку со скоростью потока 1-2 капли/секунду	Избегать высыхания слоя колонки
Условия элюирования	Сегментированное элюирование 0,5 мл + 1,0 мл метанола	Соберите весь элюат
Сконцентрируйте и перерастворите	Продуйте азотом при 50 °C и перерастворите в 0,5 мл подвижной фазы	Избегайте деградации DON

---

Хроматографический анализ и количественный расчет

В анализе ВЭЖХ использовалась подвижная фаза метанол-вода-ледяная уксусная кислота (15:84,9:0,1), длина волны детектирования 220 нм, объем вводимой пробы 100-300 мкл и количественное определение методом внешнего стандарта.

Создание калибровочной кривой

Перед ежедневным анализом следует создать 6-точечную калибровочную кривую, охватывающую диапазон концентраций 75-450 нг/мл. Наклон и пересечение следует определять методом линейной регрессии с коэффициентом корреляции 0,99 или выше.

Формула расчета результата

Формула расчета содержания DON: wDON = cDON × V3 × V1 / (V2 × ms)
Если для очистки используется 2 мл раствора экстракта, она упрощается до: wDON = cDON × 2
Если для очистки используется 0,5 мл раствора экстракта, она упрощается до: wDON = cDON × 8

---

Данные о валидации метода и точности

Проверенный международной оценкой воздействия на окружающую среду, метод показал хорошую точность при различных уровнях концентрации, а предел повторяемости (r) и предел воспроизводимости (R) соответствовали требованиям обнаружения. 0,9 505 233,2 329,2 1,3 1013 232,9 299,0 0,7

---

Рекомендации и меры предосторожности при внедрении стандарта

При внедрении стандарта DIN EN 15791 важно сосредоточиться на четырех ключевых аспектах: представительность пробы, чистота реагента, калибровка прибора и безопасность эксплуатации.

Защита лабораторной безопасности

ДОН является высокотоксичным веществом. Все стандартные растворы должны готовиться в вытяжном шкафу. Операторы должны носить перчатки, защитные очки и лабораторные халаты, чтобы избежать прямого контакта.

Меры контроля качества

Каждая партия образцов должна включать холостые контроли, образцы для извлечения с добавлением добавок и образцы для контроля качества. Степень извлечения должна быть в диапазоне 70–120 % для обеспечения надежности результатов испытаний.

Ключевые моменты обслуживания приборов

Системы ВЭЖХ требуют регулярной очистки проточного тракта, замены уплотнительных колец, а также калибровки расхода насоса и длины волны детектора для поддержания хорошей эффективности разделения хроматографической колонки.

---

Технологическое развитие и влияние на отрасль

Выпуск DIN EN 15791:2009 знаменует собой значительный шаг вперед в технологии обнаружения микотоксинов в кормах. Применение технологии очистки на иммуноаффинных колонках значительно повысило специфичность и чувствительность обнаружения, обеспечив надежную техническую поддержку для внедрения правил ЕС по безопасности кормов.

Этот стандарт соответствует Регламенту Комиссии ЕС (ЕС) № 401/2006, устанавливающему полную систему контроля качества от отбора проб до анализа, что имеет большое практическое значение для обеспечения безопасности кормов для животных и безопасности пищевых продуктов.