NY/T 3785-2020
Качественное обнаружение вируса веерных листьев винограда методом флуоресцентной ПЦР в реальном времени (Англоязычная версия)
- Стандартный №
- NY/T 3785-2020
- язык
- Китайский, Доступно на английском
- Дата публикации
- 2020
- Разместил
- Professional Standard - Agriculture
- Последняя версия
- NY/T 3785-2020
- сфера применения
-
Техническое обоснование стандарта
Вирус веерной листовертки винограда (ВВЛВ) — один из основных патогенов, представляющих угрозу для виноградарства. В настоящем стандарте используется оборудование, такое как прибор для флуоресцентной ПЦР в реальном времени, для создания системы быстрого обнаружения, которая в 100–1000 раз чувствительнее традиционного метода ИФА.
Процесс определения ядра
Этапы Ключевые параметры Точки контроля качества Выделение РНК Концентрация гуанидинтиоцианата в лизате: 47,2 г/100 мл Обработка воды DEPC для предотвращения деградации РНК Обратная транскрипция 42℃ 50 мин Концентрация случайного праймера: 1 мкг/реакция ПЦР-амплификация qPCR 40 циклов (95℃ 15 с→60℃ 20 с) Пик кривой плавления: 82±1℃
Характеристики прибора и реагентов
Высокоскоростная охлаждаемая центрифуга должна соответствовать требованию ≥12 000 об/мин. Исследования показали, что недостаточная скорость может привести к снижению эффективности экстракции РНК более чем на 30%.
Ключевые реагенты SYBR Green qPCR mix должны содержать:
- Прямой праймер: 5'-TCTAGGGTTCAGAAGGACCG-3'
- Обратный праймер: 5'-AGGAGGAGGCGAAGGAATC-3'
Рекомендации по внедрению
1. Лаборатории должны установить процедуру калибровки для ультрамикродетектора нуклеиновых кислот и белков, чтобы гарантировать, что погрешность измерения концентрации РНК составляет ≤5%.
2. Рекомендуется настроить два повтора для каждой партии тестирования. Различия значений Ct более 1,0 требуют повторного тестирования.
3. В качестве положительного контроля рекомендуется использовать стандартный штамм ATCC (VR-1497).
NY/T 3785-2020 Ссылочный документ
- GB/T 6682 Вода для аналитических лабораторий. Спецификация и методы испытаний.
NY/T 3785-2020 История
- 2020 NY/T 3785-2020 Качественное обнаружение вируса веерных листьев винограда методом флуоресцентной ПЦР в реальном времени
