ISO/TS 21569-3:2020
Горизонтальные методы анализа молекулярных биомаркеров. Методы анализа для обнаружения генетически модифицированных организмов и производных продуктов. Часть 3. Специфический для конструкции метод ПЦР в реальном времени для

Стандартный №

ISO/TS 21569-3:2020

Дата публикации

2020

Разместил

International Organization for Standardization (ISO)

Последняя версия

ISO/TS 21569-3:2020

сфера применения

Анализ стандартной технической структуры

В этом разделе основное внимание уделяется системе обнаружения, созданной с помощью устройства ПЦР в реальном времени, которое использует специфические праймеры (35SP03.f/pat-7.r) и зонд (GSS01.s) для идентификации продукта амплификации 111 п.н. последовательности P35S-pat. Стандарт требует, чтобы количество экстрагированной ДНК составляло ≥20 нг/мкл, а система амплификации объемом 25 мкл содержала:

Компоненты	Концентрация	Функция
ДНК-полимераза горячего старта	0,5 ед./реакция	Снижение неспецифической амплификации
dNTPs	200 мкМ	Нуклеотидные субстраты
MgCl2	1,5 мМ	Регуляция активности фермента

---

Ключевые данные проверки эффективности

Результаты теста на чувствительность

Совместная проверка, проведенная 14 лабораториями, показала (таблица 1), что при количестве копий P35S-pat ≥10/реакцию уровень обнаружения составил >98%.

1. Предварительная денатурация при 95℃ в течение 10 мин
2. 45 циклов (95℃ в течение 15 с → 60℃ в течение 60 с)

Тип образца	ПКО(количество копий)	ОСО(%)
Рапс	5	29,5
ДНК сои	2	21,8

---

Реализация рекомендации

• Требования к контролю качества: Каждая партия должна включать отрицательный контроль (материал без ГМО), положительный контроль (содержащий 1% ДНК рапса T45) и контрольный образец для экстракции.
• Совместимость с устройствами: Проверено для основных приборов, таких как ABI 7500/7900HT и LightCycler 480.
• Примечание о специфичности: Кукуруза Bt11 может давать нецелевую амплификацию 410 п.н., которую необходимо исключить с помощью анализа кривой плавления.

Сравнение развития технологий

Версия	Основные улучшения	Улучшенный предел обнаружения
2015 Версия	Основной метод установления	20 копий
Издание 2020 года	Оптимизированный анализ in silico	10 копий