GB/T 35098-2018
Микролучевой анализ. Просвечивающая электронная микроскопия. Метод морфологической идентификации вирусов растений с помощью просвечивающей электронной микроскопии. (Англоязычная версия)

Стандартный №

GB/T 35098-2018

язык

Китайский, Доступно на английском

Дата публикации

2018

Разместил

General Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine of the People‘s Republic of China

Последняя версия

GB/T 35098-2018

сфера применения

Анализ стандартной технической структуры

Этот стандарт систематически стандартизирует три основные технологии для идентификации вирусов растений с использованием просвечивающей электронной микроскопии: негативное окрашивание, иммуноэлектронная микроскопия и технология ультратонких срезов. Техническая структура показана на рисунке ниже:

Технические методы	Разрешение	Применимые сценарии	Время подготовки
Метод отрицательного окрашивания	2-5 нм	Экспресс-диагностика вирусной суспензии	15-30 мин
Иммуноэлектронная микроскопия	5-10 нм	Серологическая идентификация вируса	2-4 ч
Ультратонкий срез	1–2 нм	Внутриклеточная локализация вируса	3–5 дней

---

Инновации в основных технологиях

1. Система комплексного окрашивания

Три стандартных раствора для негативного окрашивания являются взаимодополняющими:

• Фосфорновольфрамовая кислота (ФВК): универсальный краситель с хорошей контрастностью для большинства вирусов при pH 6,7
• Ацетат урана: окрашивание с высоким разрешением (pH 4,2), но следует избегать солевых помех
• Молибдат аммония: специально для оболочечных вирусов (pH 7,0), с минимальным деструктивным эффектом

2. Технология иммунообогащения

Метод иммуноадсорбции-модификации позволяет достичь обогащения вируса посредством трехэтапной реакции:

1. Сетка, предварительно покрытая специфическими антителами
2. Образование комплекса вирусный антиген-антитело
3. Вторичное мечение антителами усиливает сигнал

---

Ключевые рабочие характеристики

Ультрапрактические характеристики

Стандарт четко определяет, что толщина среза должна контролироваться в диапазоне 50-100 нм и посредством:

• Двойной фиксации: глутаральдегид (2-3%) + тетроксид осмия (1%)
• Градиентной дегидратации: концентрация этанола увеличивается с 50% до 100%
• Заливки смолой Spurr: формула с низкой вязкостью обеспечивает проникновение

Параметры наблюдения электронной микроскопии

Режим наблюдения	Ускоряющее напряжение	Увеличение	Требования к масштабу
Негативное окрашивание	60-80 кВ	4 000-100 000×	Обязательно
Ультратонкие срезы	80-100 кВ	1 000-50 000×	Обязательно

---

Рекомендации по внедрению стандарта

План конфигурации лаборатории

Согласно пункту 5.1 стандарта, базовая лаборатория должна быть оснащена:

• Просвечивающим электронным микроскопом (включая ПЗС-камеру)
• Ультратонким микротомом + алмазный нож
• Аппарат тлеющего разряда (с гидрофильной сеткой)
• Системой постоянной температуры и влажности (температура 20±5℃, влажность <60%)

Создание базы данных морфологии вирусов

Рекомендуется обратиться к Приложению B для создания локализованной базы данных, включающей:

1. Типичная морфология вирусов 118 родов в 26 семействах
2. Характерные тельца включения структура
3. Атлас цитопатологических изменений

GB/T 35098-2018 Ссылочный документ

• SN/T 2122 Методы карантинного отбора проб ввозимых и вывозимых растений и растительной продукции
• SN/T 2964 Технические характеристики для обнаружения вирусов растений

GB/T 35098-2018 История

• 2018 GB/T 35098-2018 Микролучевой анализ. Просвечивающая электронная микроскопия. Метод морфологической идентификации вирусов растений с помощью просвечивающей электронной микроскопии.

Специальные темы по стандартам и нормам

стандарты и спецификации