GB/T 35515-2017
Химические вещества — анализ рыбы на эстрогенную и андрогенную активность, а также ингибирование ароматазы. (Англоязычная версия)

Стандартный №

GB/T 35515-2017

язык

Китайский, Доступно на английском

Дата публикации

2017

Разместил

General Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine of the People‘s Republic of China

Последняя версия

GB/T 35515-2017

сфера применения

Основы стандарта и развитие технологий

Этот стандарт, эквивалентный Руководству по тестированию ОЭСР 230 (2009 г.), является первым в Китае стандартизированным методом тестирования эндокринного воздействия химических веществ на рыб. В связи с растущим загрязнением окружающей среды гормонами традиционные тесты на острую и хроническую токсичность уже недостаточны для специфической оценки эндокринных нарушений. Этот стандарт устанавливает 21-дневную систему краткосрочного скрининга, включающую такие биомаркеры, как вителлоген (VTG) и вторичные половые признаки.

---

Сравнение основных экспериментальных проектов

Элементы	Толстоголовый гольян	Медака	Зебрафиш
Экспериментальный контейнер	≥10 л (раствор 8 л)	≥2 л (раствор 1,5 л)	≥5 л (раствор 4 л)
Конфигурация рыб	2 самца + 4 самки/контейнер × 4 повтора	5 самцов + 5 самок/контейнер × 2 повтора	5 самцов + 5 самок/контейнер × 2 повтора
Ключевые конечные точки	VTG+подсчет папиллярных клеток	VTG+подсчет папиллярных клеток	Только тест VTG
Тип образца	Кровь (50-60 мкл/хвост)	Гомогенат печени	Гомогенат головы и хвоста/кровь (5-15 мкл)

---

Анализ ключевых технических моментов

1. Система обеспечения качества

• Растворенный кислород: ≥60% значения насыщения воздуха (ASV)
• Отклонение концентрации тестируемого вещества: контролируется в пределах ±20% от приготовленной концентрации
• Исторические контрольные данные: Требуются установленные лабораторией базовые значения VTG (самцы и самки должны отличаться не менее чем на три порядка величины).

2. Технические характеристики прибора

В стандарте конкретно указано, что прецизионные весы должны иметь точность ±0,5 мг, а для сбора крови необходимо использовать капилляры, промытые гепарином натрия (для толстоголовых пескарей) или шприцы (для пункции сердца данио-рерио). Для иссечения печени у медаки требуется стереомикроскоп с системой двойных щипцов (см. иллюстрацию в Приложении А).

---

Трудности реализации и пути их решения

1. Предотвращение перекрестного загрязнения

Во время тестирования VTG необходимо строго соблюдать разделение по половому признаку: сначала обработать всех самцов, затем самок, использовать отдельные инструменты для разных концентрационных групп и заменять гомогенизатор для каждой рыбы во время гомогенизации печени.

2. Методы статистического анализа

Рекомендуется использовать дисперсионный анализ (ANOVA) в сочетании с тестом Даннетта. Для данных, распределенных ненормально, требуется логарифмическое преобразование. Статистическая блок-схема, представленная в Приложении G, четко указывает: При монотонной зависимости реакции от дозы предпочтение следует отдавать тесту Уильямса.

---

Рекомендации по применению в промышленности

1. Настройка положительного контроля: При добавлении новых лабораторий рекомендуется установить систему обнаружения с использованием 17β-эстрадиола (100 нг/л) и фадрозола (300 мкг/л).
2. Выбор растворителя: По возможности избегайте использования сорастворителей. При необходимости концентрация не должна превышать 100 мкл/л.
3. Интерпретация данных: Снижение VTG требует исключения гепатотоксического влияния и должно всесторонне оцениваться в сочетании с изменениями вторичных половых признаков.