Термины и определения К данному документу применяются следующие термины и определения. Герпесвирус крупного рогатого скота 4, BoHV-4 Герпесвирус крупного рогатого скота 4 относится к роду Monovirus семейства Herpesviridae, подсемейства G-herpesvirus, и является одним из основных вирусов, вызывающих репродуктивные нарушения у крупного рогатого скота. Непрямой иммуноферментный анализ Непрямой фермент-связанный Добавьте меченное ферментом вторичное антитело для обнаружения и используйте субстрат для проявления цвета и определите антиген с помощью цветной реакции. 4. Подготовка к операции непрямого иммуноферментного анализа. Подготовка экспериментальной обстановки, приборов и оборудования, приготовление промывного раствора, приготовление разбавителя, приготовление рабочего раствора индикатора должны осуществляться в соответствии с инструкцией к набору. Условия биобезопасности экспериментальной среды должны соответствовать требованиям GB/T19489, а дистиллированная вода, используемая для разбавления, должна соответствовать требованиям GB/T6682. Образцы для испытаний Свежие или замороженные образцы сыворотки, плазмы и молока можно использовать непосредственно для тестирования. Подготовка проб молока: Центрифуга при 4000 об/мин в течение 20 минут. Используйте пипетку Пастера для поглощения жидкости из среднего слоя. Будьте осторожны, чтобы не коснуться клеточного осадка в нижнем слое. Неразбавленное обезжиренное молоко можно добавлять непосредственно в микропланшет. Порядок работы: Перед использованием доведите все реагенты до температуры 21°C ± 3°C и осторожно встряхните или переверните, чтобы реагенты смешались равномерно. 4.3.1 Подготовьтесь к извлечению микропланшета и отметьте местоположение образца в протоколе операции. При использовании части микропланшета удаляйте ровно столько полосок, сколько необходимо для обнаружения образца. Неиспользованные микролуночные полоски следует завернуть в оловянную фольгу, хранить в сухом месте, запечатанным и хранить при температуре 2℃~8℃. 4.3.2 Разведение сыворотки или плазмы.Сыворотку или плазму следует разводить в соответствии с требованиями набора.Избегайте использования гемолизированных образцов и образцов с коагуляцией. При необходимости добавьте образец и разбавитель в микропланшет набора и перемешайте пипеткой. 4.3.3 Контрольные образцы (положительная сыворотка и отрицательная сыворотка) и разведение индикатора Положительная сыворотка, отрицательная сыворотка и индикатор должны быть разбавлены разбавителем в соответствии с требованиями набора. 4.3.4 Добавление образца Добавьте образец (сыворотку, плазму или образец молока) в каждую лунку, один и тот же для каждой лунки. Добавьте положительную сыворотку в лунку А1, отрицательную сыворотку в лунку А2, индикатор в лунку А3, образец 1 в лунку А4 и так далее. 4.3.5. После запечатывания микропланшета инкубируйте его при комнатной температуре в течение времени, указанного в инструкции к набору. 4.3.6 Промывание: Удалите жидкость из микропланшета и тщательно промойте каждый планшет 3 раза примерно по 300 мкл промывочного раствора. После каждой промывки стряхивайте жидкость в каждой лунке планшета.Во время промывки и перед добавлением следующего реагента не допускайте высыхания реакционной пластинки и не допускайте образования пузырьков в лунках.После последнего стряхивания в абсорбирующий материал добавляйте воду. Сильно сожмите пластину, чтобы впитать оставшуюся жидкость. 4.3.7 Разбавьте ферментный конъюгат Разбавьте ферментный конъюгат разбавителем по мере необходимости. 4.3.8 Добавьте ферментный конъюгат Добавьте ферментный конъюгат в каждую лунку и хорошо встряхните. После запечатывания микропланшета инкубируйте при комнатной температуре в течение времени, указанного в инструкции к набору, и промойте в соответствии с шагом 4.3.6. 4.3.9 Добавление субстрата Добавьте раствор субстрата в каждую лунку. Инкубируйте при комнатной температуре в течение времени, указанного в инструкции к набору. 4.3.10 Добавьте стоп-раствор в каждую лунку для остановки реакции. 4.3.11 Определите значение оптической плотности (значение ОП) Предварительно прогрейте устройство для считывания микропланшетов в течение 15 минут и считайте значение оптической плотности при длине волны, указанной в инструкциях к набору, в течение 5 минут после добавления стоп-раствора. Экспериментальный тест на достоверность действителен только при соблюдении условий, указанных в инструкциях к набору. Расчет результата Для расчета результата используйте формулу расчета, указанную в руководстве к набору. Результаты оценивались с использованием критериев оценки, указанных в инструкциях к набору.
T/NAASS 057-2023 История
2023T/NAASS 057-2023 Техническая спецификация на определение антител непрямого ИФА к вирусу герпеса крупного рогатого скота 4 типа