Технические требования 5.1 Сырье и вспомогательные материалы 5.1.1 должны соответствовать требованиям T/CSCB0001. 5.1.2 Стандарты оценки и скрининга доноров, методы сбора, стандарты транспортировки и стандарты передачи донорских клеток должны быть установлены для обеспечения безопасности доноров и клеток. 5.1.3 Доноры должны быть проверены на ВИЧ, ВГВ, ВГС, HTLV, ВЭБ, ЦМВЦ и ТП, а результаты зафиксированы. 5.2 Методы выделения и культивирования 5.2.1 Выделение и экстракция образцов ткани амниотической мембраны человека Разрезают на кусочки и используют расщепление трипсином для выделения эпителиальных стволовых клеток амниотической мембраны человека. Была проведена первичная культура амниотических эпителиальных стволовых клеток человека. 5.2.2 Смена среды с амниотическими эпителиальными стволовыми клетками человека.Среду меняют в зависимости от роста клеток. 5.2.3 Пассирование человеческих амниотических эпителиальных стволовых клеток должно осуществляться с соответствующей плотностью, своевременно и быстро. 5.2.4 Криоконсервация амниотических эпителиальных стволовых клеток человека Криоконсервированные клетки запрограммированы на охлаждение и затем хранение в жидком азоте. 5.2.5. Получение амниотических эпителиальных стволовых клеток человека: Достаньте пробирку для криоконсервации, быстро разморозьте ее, центрифугируйте и промойте, а затем культивируйте. 5.2.6 Раствор амниотических эпителиальных стволовых клеток человека Раствор амниотических эпителиальных стволовых клеток человека должен находиться в гомогенном состоянии, без хлопьевидного осаждения, а выживаемость клеток должна составлять ≥90%. 5.3 Критические показатели качества 5.3.1 Морфология клеток Когда клетки прикрепляются и культивируются, они приобретают неправильную многоугольную форму, растут, как брусчатка, и имеют однородную форму. 5.3.2 Хромосомный кариотип Нормальный кариотип должен быть 46,XX или 46,XY. 5.3.3 Выживаемость клеток: Выживаемость некриоконсервированных клеток составляет ≥90%, а выживаемость клеток после криоконсервации и восстановления составляет ≥70%. 5.3.4 Экспрессия клеточных маркерных белков CK19, CD29, CD44, CD73, CD90 и CD105 была положительной, экспрессия CD31, CD34, CD45 и CD49d — отрицательной. 5.3.5 Иммунорегуляция: Индоламин-2,3-диоксигеназа (IDO) экспрессируется после индукции воспалительными факторами (IFN-γ или IFN-γ в сочетании с TNF-α). Совместное культивирование с Т-лимфоцитами может ингибировать пролиферацию Т-лимфоцитов и секрецию IFN-γ и TNF-α. 5.3.6 Трехлинейная дифференциация обладает дифференцировочным потенциалом остеогенеза, адипогенеза и хондрогенеза. 5.3.7 Результаты теста на образование опухолей in vivo у животных с опухолеобразующим иммунодефицитом (например, мышей) отрицательны. 5.3.8. Микроорганизмы, такие как грибы, бактерии, микоплазма, ВИЧ, HBV, HCV, HTLV, EBV, HCMV и TP, являются отрицательными. 5.4 Управление процессом 5.4.1 Управление процессом, такое как амплификация, криоконсервация и восстановление, должно соответствовать требованиям T/CSCB0001. 5.4.2 Результаты теста STR клеток должны соответствовать результатам донорских клеток. 6 Методы проверки
T/LNSI 002-2023 История
2023T/LNSI 002-2023 Амниотические эпителиальные стволовые клетки человека