ISO/TS 4985:2023
Молоко и молочные продукты. Определение активности щелочной фосфатазы. Флуориметрический метод микропланшетов.

Стандартный №

ISO/TS 4985:2023

Дата публикации

2023

Разместил

International Organization for Standardization (ISO)

Последняя версия

ISO/TS 4985:2023

сфера применения

Техническое обоснование и эволюция стандарта

Щелочная фосфатаза (ЩФ), ключевой ферментный индикатор эффективности пастеризации молочных продуктов, претерпела многочисленные итерации технологии обнаружения. Традиционные колориметрические методы постепенно были заменены более чувствительными методами флуоресценции. Технология микропланшетов, используемая в этом стандарте, снижает предел обнаружения до 15 мЕд/л, что в десять раз превышает чувствительность по сравнению с традиционными методами.

---

Принцип метода

Основан на ферментативной реакции: 4-MUP гидролизуется под действием ЩФ с образованием флуоресцентного продукта 4-MU. Формула реакции:

Компоненты	Функция	Параметры обнаружения
4-MUP	Нефлуоресцентный субстрат	2,5 ммоль/л
4-MU	Флуоресцентный продукт	Ex365nm/Em450nm

---

Ключевые рабочие моменты

Подготовка образцов

• Образцы молока: Разбавьте буфером AMP (5.3) в соотношении 1:9
• Образцы сыра: гомогенизируйте с буфером экстракции DEA (5.5) и центрифугируйте для получения супернатанта

Калибровка прибора

Используйте 6-точечную стандартную кривую (0,47–15 мкмоль/л 4-MU) с R² ≥ 0,99.

Концентрация (мкмоль/л)	Среднее значение RFU	Наклон
15,0	37 695	24 166 413
7,5	10 320

---

Сравнение производительности методов

Параметры	Этот метод	Традиционный метод флуоресценции
Предел обнаружения	15 мЕд/л	50 мЕд/л
Повторяемость	4,1%	8%

---

Рекомендации по внедрению

Ключевые моменты для контроля качества

1. Каждая партия теста должна включать отрицательный контроль (термообработанный образец) и положительный контроль (разбавленный сырым молоком образец)
2. Особое внимание следует уделять отбору проб твердого сыра: образцы следует отбирать на расстоянии 0,5–1 см от корки (как показано на рисунке C.1)
3. Если значение ОЕФ превышает максимальный стандарт, это следует соответствующим образом разбавить образцом без ЩФ

Обращение с интерферирующими веществами

Если обнаружены аномально высокие значения, следует выполнить следующее:

• Тест на интерферирующее вещество (9.4.2)
• Тест на ЩФ термотолерантных микроорганизмов (обработка при 63 °C в течение 30 минут)

ISO/TS 4985:2023 История

• 2023 ISO/TS 4985:2023 Молоко и молочные продукты. Определение активности щелочной фосфатазы. Флуориметрический метод микропланшетов.

Специальные темы по стандартам и нормам

стандарты и спецификации