Термины и определения К данному документу применяются следующие термины и определения. Коронавирус крупного рогатого скота BCV принадлежит к семейству Coronaviridae и является важным патогеном, вызывающим диарею у новорожденных телят и инфекции дыхательных путей у взрослого крупного рогатого скота. Сэндвич-ферментный иммуносорбентный анализ Сэндвич-ферментный иммуносорбентный анализ, ИФА Тестируйте образец и меченное ферментом антитело против антигена. Соответствующий антиген может специфически связываться с антителом. и меченное ферментом антитело на носителе. Несвязавшиеся материалы и меченные ферментом антитела смываются. Добавляется ферментный субстрат и проводится цветная реакция для определения антигена. 4. Подготовка к тесту для сэндвич-иммуноферментного анализа. Экспериментальную обстановку, приборы и оборудование, приготовление промывного раствора, приготовление разбавителя и приготовление рабочего раствора индикатора проводят в соответствии с инструкцией к набору. Условия биобезопасности экспериментальной среды должны соответствовать требованиям GB/T19489, а дистиллированная вода, используемая для разбавления, должна соответствовать требованиям GB/T6682. Для тестирования образцов соберите образцы коровьих фекалий, добавьте равный объем разбавителя образца и дайте ему отстояться естественным путем без центрифугирования в течение 10 минут. Перенесите надосадочную жидкость раствора фекалий в центрифужную пробирку емкостью 1,5 мл. Перед использованием верните все реагенты в температуру 18℃ ~ 24℃, осторожно встряхните или переверните, чтобы реагенты смешались равномерно. 4.3.1 Снимите планшет. Выньте микропланшет и отметьте положение образца в протоколе операции. При использовании части микропланшета удаляйте ровно столько полосок, сколько необходимо для обнаружения образца. Неиспользованные микролуночные полоски следует завернуть в оловянную фольгу, хранить в сухом месте, запечатанным и хранить при температуре 2℃~8℃. 4.3.2 Добавление образцов Добавьте образцы в каждую лунку, добавьте образец 1 в лунки A1 и B1, добавьте образец 2 в лунки C1 и D1 и т. д. Добавьте положительные контроли (например, G1 и H1) таким же образом. 4.3.3 Индукция После закрытия микролуночного планшета инкубируйте при комнатной температуре в течение времени, указанного в инструкции по эксплуатации набора. 4.3.4 Промывание. Удалите жидкость из микропланшета и промойте каждую лунку 3 раза примерно по 300 мкл промывочного раствора. После каждой промывки стряхивайте жидкость в каждой лунке планшета.Во время промывки и перед добавлением следующего реагента не допускайте высыхания реакционной пластинки и не допускайте появления пузырьков в лунках.После последнего стряхивания в абсорбирующий материал добавляйте воду. .Сильно сожмите планшет и впитайте оставшуюся жидкость 4.3.5 Добавьте ферментный конъюгат Добавьте ферментный конъюгат в каждую лунку и хорошо встряхните. После герметизации инкубируйте при комнатной температуре в течение времени, указанного в инструкции к набору, и промойте в соответствии с этапами шага 4.3.4. 4.3.6 Добавление субстрата Добавьте раствор субстрата в каждую лунку. Раствор субстрата, добавляемый в лунки, должен быть совершенно бесцветным. Инкубировать при комнатной температуре в темноте в течение времени, указанного в инструкции к набору. 4.3.7 Добавление стоп-раствора Добавьте стоп-раствор в каждую лунку, чтобы остановить реакцию. 4.3.8 Определите значение оптической плотности (значение ОП) Предварительно прогрейте устройство для считывания микропланшетов в течение 15 минут и считайте значение оптической плотности (ОП) при длине волны, указанной в инструкциях к набору, в течение 5 минут после добавления стоп-раствора. Экспериментальный тест на достоверность действителен только при соблюдении условий, указанных в инструкциях к набору. Расчет результата Для расчета результата используйте формулу расчета, указанную в руководстве к набору. Результаты оценивались с использованием критериев оценки, указанных в инструкциях к набору.
T/NAASS 058-2023 История
2023T/NAASS 058-2023 Технические условия на определение ИФА-антигена коронавируса крупного рогатого скота сэндвич-методом