ISO 11781:2025
Молекулярный биомаркерный анализ — Требования и руководство по однолабораторной валидации качественных методов полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени

Стандартный №

ISO 11781:2025

Дата публикации

2025

Разместил

International Organization for Standardization (ISO)

Последняя версия

ISO 11781:2025

сфера применения

Анализ основных требований стандарта

ISO 11781:2025 обеспечивает систематическую основу для валидации методов качественной ПЦР в реальном времени в анализе пищевых продуктов в одной лаборатории, уделяя особое внимание стандартизации следующих показателей проверки производительности:

Параметры валидации	Технические требования	Критерии приемки
Предел обнаружения (LOD95%)	6 градиентов концентрации × 12 повторов	≤20 копий целевой последовательности
Эффективность ПЦР	Анализ наклона стандартной кривой	-3,1~-3,6 (эффективность 90-110%)
Специфичность	Биоинформатика + экспериментальная проверка	Отсутствие перекрестной реакции (≥2500 копий нецелевой ДНК)

---

Ключевые технические моменты

1. Метод определения предела обнаружения

Потеря обнаружения (LOD) _95% была рассчитана с использованием обобщенной линейной смешанной модели (GLMM):

• Необходимо предоставить данные о числе копий, рассчитанные с помощью цифровой ПЦР или эквивалентов генома
• Для статистического анализа рекомендуется пакет POD на языке R
• Пример проверки: если λ=0,15, LOD_95%=20 копий (формула: 3/λ)

2. Стратегия проверки специфичности

Случай: Необходимо проверить метод обнаружения генетически модифицированной сои:

1. Биоинформатический анализ: Выравнивание BLAST исключает гомологичные последовательности, такие как кукуруза и рис
2. Экспериментальная проверка: Проверка обнаружения 60 копий целевой последовательности при 20 нг/мкл фоновой ДНК

---

Предложения по реализации

Подготовка оборудования и материалов

Для калибровки числа копий рекомендуется использовать цифровой прибор для ПЦР с капельной ДНК. Рекомендуемые реагенты:

• ДНК спермы лосося (20 нг/мкл) молекулярной биологии в качестве фоновой ДНК
• Стандартный материал: сертифицированный NIST стандарт плазмидной ДНК

Дизайн теста на надежность

Для оценки влияния колебаний следующих параметров используется ортогональный экспериментальный дизайн:

Температура отжига	±1°C
Концентрация праймера	-30%
Объем реакции	±5%

---

Стандартный эволюционный анализ

Основные обновления по сравнению с предыдущей версией:

• Добавлено Цифровая ПЦР как золотой стандарт для определения числа копий
• Уточнены требования к параметрам статистической модели GLMM
• Расширен диапазон обнаружения видов пищевых аллергенов

ISO 11781:2025 Ссылочный документ

• ISO 16577 Анализ молекулярных биомаркеров. Словарь методов анализа молекулярных биомаркеров в сельском хозяйстве и производстве продуктов питания.
• ISO 21571 Пищевые продукты. Методы анализа для обнаружения генетически модифицированных организмов и продуктов их переработки. Экстракция нуклеиновых кислот ПОПРАВКА 1

ISO 11781:2025 История

• 2025 ISO 11781:2025 Молекулярный биомаркерный анализ — Требования и руководство по однолабораторной валидации качественных методов полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени

стандарты и спецификации