Определение флавоноидов в красных финиках 1 Область применения Настоящий стандарт требует применения к красным финикам в Синьцзяне. Настоящий стандарт определяет методы определения флавоноидов в красных финиках - циклического аденозинмонофосфата, рутина, кверцетина и хлорогеновой кислоты. Этот документ применим для обнаружения флавоноидов в свежих красных финиках и сушеных красных финиках в этом регионе. 2Нормативно-справочные документыДокументы, цитируемые в настоящем документе, необходимы для применения настоящего документа. Для датированных ссылок к настоящему документу применяется только датированная версия. Для недатированных справочных документов к настоящему документу применяется последняя версия (включая все поправки). ГБ/Т красных фиников. 3.2 Сушеные красные финики – это красные финики, обработанные путем естественной воздушной сушки или запекания. 3.3 Флавоноиды Первоначально флавоноиды относились к общему названию класса соединений, полученных из 2-фенилхромона в качестве скелета. Сейчас это вообще относится к общему названию ряда соединений, в которых два бензольных кольца соединены друг с другом через три атома углерода, то есть общее название класса соединений со структурой С6-С3-С6. 4. Принцип. Циклический аденозинмонофосфат, рутин, кверцетин и хлорогеновая кислота в мармеладе экстрагировались водой и 30% водным раствором метанола соответственно, разделялись на хроматографической колонке ODS-BP и разделялись диодным детектором. Измерения проводились при длине волны 254 нм. и 325 нм и количественно определяли методом внешнего стандарта. 5Реагенты и материалы. Если не указано иное, в анализе используются только реагенты, подтвержденные как аналитические, и вода первого сорта, указанная в GB/T 6682. 5.1 Реагент калия дигидрофосфат, метанол (ч.ч.). 5.2 Стандарты Циклический аденозинмонофосфатный стандарт, рутин, кверцетин, стандарт хлорогеновой кислоты. 5.3 Приготовление стандартного раствора Приготовление исходного стандартного раствора (1 мг/мл): Точно взвешивают 0,0001 г каждого из четырех эталонных веществ, разбавляют до 100 мл и хранят в холодильнике при температуре 4 ℃ в темноте. Приготовление стандартного рабочего раствора: перед использованием разбавьте стандартный исходный раствор циклического аденозинмонофосфата до стандартного рабочего раствора 1–20 мкг/мл и разбавьте три стандартных исходных раствора рутина, кверцетина и хлорогеновой кислоты 30% водным раствором. метанол. Приготовьте смешанный стандартный рабочий раствор с концентрацией 0,1–5 мкг/мл. 5.4Материал Микропористая мембрана: 0,22 мкм. 6Печи для инструментов и оборудования. Сито 50 меш. Электронные весы: Чувствительность 0,0001g. Ультразвуковой очиститель. Центрифуга: Скорость не ниже 4000 об/мин. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ): Оборудована диодно-матричным детектором. Система сверхчистой воды. 7Этапы анализа 7.1Подготовка проб Разрежьте образец мармелада на тонкие полоски, поместите его в духовку при температуре 100℃ для высыхания, а затем протрите через сито 50 меш для дальнейшего использования. 7.2. Экстракция проб. Точно взвесьте 2 г измельченных образцов (с точностью до 0,0001 г) в центрифужную пробирку емкостью 50 мл, добавьте определенное количество воды, экстрагируйте ультразвуком в течение 30 минут, охладите до комнатной температуры и разбавьте вода. Центрифугируйте при 4000 об/мин в течение 10 мин и отфильтруйте надосадочную жидкость через мембрану (5.5) для измерения циклического аденозинмонофосфата. Точно взвесьте 4 г измельченного образца (с точностью до 0,0001 г) и 50 мл в центрифужной пробирке, добавьте определенное количество 30% водного раствора метанола, экстрагируйте ультразвуком в течение 30 минут, охладите до комнатной температуры и разбавьте 30 % водный раствор метанола. Центрифугируют при 4000 об/мин в течение 10 мин и фильтруют надосадочную жидкость через мембрану (5.5) для определения рутина, кверцетина и хлорогеновой кислоты. 7.3 Определение 7.3.1 Эталонные условия для жидкостной хроматографии Хроматографическая колонка: ODS-BP (4,6 мм×200 мм, размер частиц 5 мкм) или хроматографическая колонка с эквивалентной производительностью, температура колонки 40 ℃. Условия определения циклического аденозинмонофосфата: подвижная фаза: 20 мМ раствор дигидрофосфата калия (рН=3): метанол (80:20), скорость потока 1 мл/мин, объем инъекции 10 мкл, длина волны 254 нм. Условия определения рутина, кверцетина и хлорогеновой кислоты: Подвижная фаза: 20 мМ раствор дигидрофосфата калия (рН=3): метанол, скорость потока 1 мл/мин, объем инъекции 10 мкл, длина волны 325 нм. Градиентное элюирование, программа элюирования представлена в таблице 1. Таблица 1. Время программы градиентного элюирования ВЭЖХ, мин 20 мМ раствор дигидрофосфата калия (рН=3), % метанола, % 70 30 1 70 30 10 20 90 12 70 30 16 70 30 7.3.2 Нарисуйте схему стандартная кривая для определения концентрации 1, 2, 4, 10, 20 мкг/мл стандартного рабочего раствора циклического аденозинмонофосфата, а также концентрации 0,1, 0,2, 0,4, 0,8, 1 мкг/мл рутина, кверцетина, зеленого Исходная кислота был смешан со стандартным рабочим раствором, и была построена стандартная кривая для получения уравнения линейной регрессии и коэффициента линейной корреляции (R).Все коэффициенты корреляции были больше 0,999, что указывает на то, что четыре измеряемых компонента имели хорошую линейную зависимость. отношения в этом диапазоне концентраций. Предел обнаружения (LOD) метода был определен с трехкратным увеличением отношения сигнал/шум. LOD составлял 0,2 ~ 1 мг/кг. Подробности см. в таблице 2. Хроматограммы эталонного вещества и образцов с красным фиником представлены показано на рисунке 1. 7.3.3 Количественное определение. В одинаковых хроматографических условиях берут равный объем испытуемого раствора пробы и соответствующую концентрацию стандартного рабочего раствора для хроматографического анализа, качественный по времени удерживания, количественный по внешнему стандартному методу определения площади хроматографического пика. . Значение отклика каждого флавоноидного соединения в тестируемом растворе образца должно находиться в пределах диапазона стандартной кривой, и если оно превышает линейный диапазон, его следует разбавить в соответствующее кратное число в соответствии с измеренной концентрацией перед анализом. 8. Подсчет результатов. Рассчитать содержание циклического аденозинмонофосфата, рутина, кверцетина и хлорогеновой кислоты в пробе по формуле (1). (1) В формуле:
——в пробе циклический аденозинмонофосфат и рутин, кверцетин, хлорогенный Величина содержания кислоты, единица измерения — миллиграммы на грамм (мг/г);
——Массовую концентрацию циклического аденозинмонофосфата, рутина, кверцетина и хлорогеновой кислоты в исследуемом растворе пробы находят по стандартной кривой. Величина , единица измерения - микрограмм на миллилитр (мкг/мл); V ---- значение объема экстракционного раствора, добавленного к образцу, единица измерения - миллилитр (мл); m ---- значение массы единицы измерения образца — грамм (г). Результат расчета сохраняет 3 значащие цифры. 9. Точность Абсолютная разница двух независимых результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, не превышает 10% от среднего арифметического. 10См. в Приложении А хроматограммы стандартных растворов остальных четырех флавоноидов и в Приложении Б хроматограммы четырех флавоноидов в мармеладе. 11Правила контроля11.1Контрольные партииФиники красные одного сорта, одного сорта, поставляемые одной партией, являются одной партией. 11.2 Метод отбора проб Отбираемые пробы должны быть репрезентативными и должны отбираться случайным образом из разных частей всей партии товара.Результаты испытаний проб применимы ко всей испытательной партии. 11.3 После того, как пакет для отбора проб вынут, возьмите в общей сложности 1000 г образцов из верхней, средней и нижней частей каждой упаковки, тщательно перемешайте все образцы и отберите образцы для проверки в соответствии с методом четвертования. 11.4 Подготовка пробы Используйте метод деления на четверти или метод деления, чтобы усадить пробу до необходимого веса, обычно 1 кг. Пробы с повышенным содержанием воды помещают в гомогенизатор для гомогенизации, причем подготовленные пробы из расчета не менее 100-300 г на порцию помещают в чистую тару, герметично запечатывают и маркируют.