SN/T 5207-2020
Карантин и метод идентификации вируса шока черники (Англоязычная версия)

Стандартный №

SN/T 5207-2020

язык

Китайский, Доступно на английском

Дата публикации

2020

Разместил

Professional Standard - Commodity Inspection

Последняя версия

SN/T 5207-2020

сфера применения

Анализ стандартной технической структуры для вируса шока черники

Параметры обнаружения	DAS-ELISA	Обычная ОТ-ПЦР	Вложенная ОТ-ПЦР	Флуоресцентная ОТ-ПЦР в реальном времени
Принцип обнаружения	Реакция антиген-антитело	Обратная транскрипция РНК и амплификация гена	Двухраундовая специфическая амплификация	Обнаружение флуоресцентно меченых зондов
Чувствительность	Средняя (уровень нг)	Высокая (уровень пг)	Очень высокая (уровень фг)
Время, затраченное	4-6 часов	3-4 часа	5-6 часов	2-3 часа
Требования к оборудованию	Считыватель микропланшетов	Прибор ПЦР + Система электрофореза	Прибор ПЦР + Система электрофореза	Прибор для флуоресцентной ПЦР в реальном времени

---

Ключевые моменты внедрения технологии Core Detection

Ключевые операции DAS-ELISA

Использование При использовании полностью автоматизированной системы иммуноферментного анализа следует уделять внимание следующему: оптимизации концентрации покрывающих антител (рекомендуемое разведение 1:1000), тщательному измельчению образца (соотношение ткани и буфера 1:10) и строгому контролю температуры инкубации (37 ± 0,5 °C). Положительный результат должен определяться значением OD405 ≥ в 2 раза больше отрицательного контроля.

Усовершенствование технологии ОТ-ПЦР

Для амплификации фрагмента длиной 450 п.н. использовались специфичные праймеры (BlShVf/r), разработанные для генома BlShV. Рекомендуется:

• Использовать центрифугу со сверхнизкой температурой (12000 g) для выделения РНК
• Увеличить температуру обратной транскрипции с 42 °C до 60 минут для увеличения выхода кДНК
• Протестировать градиент температуры отжига (52–58 °C) для оптимизации специфичности

---

Рекомендации по внедрению стандарта

1. Механизм предварительного скрининга-перепроверки: Сначала используйте DAS-ELISA для быстрого скрининга, а положительные образцы должны быть проверены с помощью ПЦР
2. Система контроля качества: Каждая партия экспериментов должна включать положительный контроль (содержащий плазмиду целевого фрагмента), отрицательный контроль (здоровые растения) и пустой контроль
3. Хранение образцов: Положительные образцы должны быть аликвотируют и хранят в морозильнике со сверхнизкой температурой -80 ℃, чтобы избежать повторного замораживания и размораживания.
4. Техническое обновление: Обратите внимание на недавно обнаруженные серотипы рода Isosigmavirus и своевременно обновляйте дизайн праймеров.

---

Технологическая эволюция и стандартное значение

Настоящий стандарт впервые устанавливает многометодную систему совместного обнаружения для BlShV. По сравнению с ранним методом обработки отдельных образцов, он обладает тремя важными преимуществами:

• Внедрение технологии флуоресцентной ПЦР в реальном времени повышает чувствительность обнаружения до 100 копий/мкл
• Вложенная ПЦР эффективно решает проблему интерференции ингибиторов в тканях черники
• Стандартизированный процесс хранения образцов (-20°C~-80°C) обеспечивает прослеживаемость обнаружения

Внедрение этого стандарта может снизить риск трансграничной передачи. По оценкам, это может повысить точность карантина саженцев черники с 82% до 98%.

SN/T 5207-2020 Ссылочный документ

• SN/T 2122 Методы карантинного отбора проб ввозимых и вывозимых растений и растительной продукции

SN/T 5207-2020 История

• 2020 SN/T 5207-2020 Карантин и метод идентификации вируса шока черники

Специальные темы по стандартам и нормам

стандарты и спецификации