SN/T 4739-2016
Карантинная техническая спецификация для патогенной Aeromonas Hydrophila. (Англоязычная версия)

Стандартный №

SN/T 4739-2016

язык

Китайский, Доступно на английском

Дата публикации

2016

Разместил

Professional Standard - Commodity Inspection

Последняя версия

SN/T 4739-2016

сфера применения

Анализ стандартной технической структуры

Модуль обнаружения	Основная технология	Индекс оценки	Временные затраты
Изоляция и культивирование	Селективная питательная среда RS	Морфологические характеристики колоний	24-48 ч
Биохимическая идентификация	Система идентификации AHM	7 биохимических реакций	24 ч
ПЦР-детекция	16S рДНК/ген аэролизина	685bp/597bp полосы	6h

---

Основные методы обнаружения

1. Характеристики выделения и культивирования

Используйте среду RS (рецепт см. в Приложении A) и культивируйте при температуре 28°C±1°C в течение 24 часов. Типичные колонии должны быть круглыми, гладкими, с ровными краями и полупрозрачными. Следует проявлять осторожность, чтобы отличить виды Pseudomonas от Pseudomonas, которые обычно проявляют зеленый пигмент на той же среде.

2. Система биохимической идентификации

Рекомендуемая стандартная система идентификации AHM включает следующие основные реакции:

• Тест на оксидазу: с использованием 1% раствора тетраметил-п-фенилендиамина
• Тест на гемолиз: наблюдение β-гемолиза на пластине с 5% овечьей кровью
• Гидролиз эскулина: черный осадок указывает на положительный результат

---

Технические характеристики молекулярной детекцией

Процедура извлечения ДНК

Бактериальную ДНК извлекали с использованием метода CTAB/NaCl. Ключевые параметры:

1. Температура лизиса: 65 ℃ в течение 10 мин
2. Условия центрифугирования: 12 000 об/мин в течение 10 мин
3. Осадочный реагент: 0,6 объема изопропанола

Система реакции ПЦР

Реакционная система 50 мкл: - 10×буфер 5 мкл - dNTP (2,5 мМ) 4 мкл - Праймер P1/P2 по 1 мкл каждый - Фермент Taq 1U - Матричная ДНК 1 мкл

---

Рекомендации по внедрению стандарта

Ключевые моменты для контроля качества

• Стандартный штамм ATCC7966 следует установить в качестве положительного контроля для каждой партии эксперименты
• ПЦР-эксперименты следует проводить в независимых секциях, чтобы предотвратить аэрозольное загрязнение
• После стерилизации питательную среду перед использованием следует уравновесить на водяной бане с температурой 45 ℃

Принципы оценки результатов

Результат можно считать положительным только при одновременном выполнении следующих трех показателей: характеристики культуры соответствуют, биохимические реакции положительны для ≥5 элементов и ПЦР амплифицирует специфические полосы Для импортных и экспортных карантинных образцов рекомендуется добавить тестирование гена вирулентности.

SN/T 4739-2016 Ссылочный документ

• GB/T 1.1-2009 Директивы по стандартизации. Часть 1: Структура и разработка стандартов.
• GB/T 6682  Вода для аналитических лабораторий. Спецификация и методы испытаний.

SN/T 4739-2016 История

• 2016 SN/T 4739-2016 Карантинная техническая спецификация для патогенной Aeromonas Hydrophila.

Специальные темы по стандартам и нормам

стандарты и спецификации