Микроспоридии могут вызывать серьезные заболевания и являются распространенными организмами окружающей среды, которые участвуют во вспышках заболеваний, передающихся через воду, поэтому были предприняты попытки выделить микроспоридии из проб воды для последующего тестирования с помощью традиционной ПЦР. К сожалению, существующие молекулярные процедуры в значительной степени нехарактерны, трудоемки и не пригодны для повседневного использования в лабораториях водоснабжения. В этих экспериментах эти ограничения были устранены за счет использования автоматизированного метода экстракции нуклеиновых кислот, рабочей станции MagNAPure LC (MPLC) и быстрого ПЦР в реальном времени, анализа Encephalitozoon LC (LC - PCR) для прибора LightCycler™ (Roche Molecular). Биохимия, Пенцбург, Германия). Используя лабораторную воду, обогащенную спорами, была выполнена модификация протокола MagNA Pure LC DNA Isolation Kit I с использованием автоматизированного MPLC. Экстрагированную ДНК амплифицировали с помощью LC-PCR. Пределы обнаружения, воспроизводимость и эффективность анализа оценивали путем сравнения пороговых значений пересечения, полученных с помощью LC-PCR. Анализ дал быстрые воспроизводимые результаты по обнаружению микроспоридий в лабораторной воде. Нижний предел обнаружения (LLOD) для спор был меньше или равен 100 спорам/мл лабораторной воды (т.е. 0,5 спор/мл). Эффективность ПЦР приближалась к 100% для спор в воде и была статистически эквивалентна для разбавлений спор в диапазоне 102-107 спор/мл (Тьюки-Крамер HSD, тест средств Даннетта). Специфичность анализа составила 100% при тестировании 39 различных кишечных микроорганизмов. Воспроизводимость внутри анализа оценивалась на уровне 104 спор/мл воды и давала среднее значение CO 33,2 +/- 0,9 с CV 2,7 (n=8). Стабильность контрольных спор при 4C оценивали путем мониторинга значения CO в зависимости от времени хранения и доказали, что концентрация ДНК спор в воде (106 спор/мл) была относительно стабильной в течение пятимесячного периода хранения (25,4 +/мл). - 1,4 цикла). ......