AWWA QTC98238 Применение флуоресцентной гидридизации in-situ (FISH) для рутинного одновременного определения видов Cryptosporidium parvum и их жизнеспособности в пробах окружающей среды
Используемые в настоящее время методы обнаружения Cryptosporidium sp. ооцисты в окружающей среде не способны отличить C. parvum от других непатогенных для человека видов Cryptosporidium. Кроме того, они не совсем подходят для рутинного определения жизнеспособности ооцист. В этом исследовании оценивались зонды флуоресцентной гибридизации in-situ (FISH) рибосомальной РНК 18S (рРНК) для одновременного определения видов C. parvum и жизнеспособности во время рутинных аналитических процедур. Также были изучены: корреляция между FISH и анализами эксцистации in vitro для определения жизнеспособности при дезинфекции хлором, а также видовая специфичность C. parvum; стабильность рРНК-мишени зонда при иммуномагнитной сепарации (IMS) и проточной цитометрической изоляции ооцист из водного концентрата детритного материала, а также при лабораторном хранении в PBS; и влияние хлора на иммунофлуоресцентное окрашивание. Данные показали хорошую общую корреляцию между эксцистацией и FISH для определения жизнеспособности ооцист в течение 15 дней воздействия гипохлорита натрия в концентрации 0–15 ppm. Целевая рРНК зонда была стабильной при очистке ооцист IMS и FACS. Целевой период полувыведения оценивался в 55 часов после пермеабилизации ооцист в PBS при комнатной температуре. Добавление РНКазы значительно уменьшало или устраняло связывание зонда. Эффекты РНКазы значительно снижались при добавлении РНКазы к образцам водного концентрата. Обсуждается полезность FISH для использования в рутинных лабораторных протоколах анализа окружающей среды.